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感染源・感染経路追求における分子疫学的手法の簡便化に関する研究

简化分子流行病学方法调查感染源和途径的研究

基本信息

批准号：
16791378
负责人：
吉井美穂
金额：
$ 2.05万
依托单位：
University of Toyama (2005)Toyama Medical and Pharmaceutical University (2004)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16791378/
关键词：
EBIC ICN RFLP O157 MRSA PFGE

项目摘要

前年度において臨床分離株であるMRSAとO157を対象としたRFLP法の溶菌手順、試薬の検討を行った結果、従来、制限酵素断片分析法(RFLP法)の全行程に5〜6日要していた手順が2日短縮することが可能となり、試薬の検討に関しては市販のものと教室作成のもので結果に差はみられず、手間とコストという面で一長一短がみられた。本年度は、前年度の結果をもとに具体的な手順についてマニュアル化して、さらにRP-PCR法を加えて分析精度の確認とより正確な手法を検討した。1.ブロック作成の際にリゾスタフィンを加えることにより、溶菌に要する時間を短縮することが可能となった。2.Pefablocにて行っていたProteinase Kの不活化処理を削除し、TEにて行っていた洗浄を1×Wash bufferで行うことによって、日数の短縮と試薬の煩雑さが減少した。3.制限酵素処理として、MRSAに対してSma IをO157に対してXba Iを使用した。4.電気泳動条件は、MRSAが電圧6.0V、スイッチタイム5.3〜34.9秒、20時間、O157が電圧6.0V、1ブロックのスイッチタイム4.0〜8.0秒、11時間、2ブロックのスイッチタイム8.0〜50.0秒、9時間とした。5.MRSAを用いたPCR法におけるmecA遺伝子の検出では、531bpのバンドがすべてのMRSA株で検出されたがMSSA株では検出されなかった。また、dru遺伝子の増幅検出においてもMRSA株のみバンドが認められMSSAでは検出されなかった。また、dru遺伝子産物は株によって404bpおよび501bpと塩基長に違いが認められた。そのため、dru法はRFLP法に比して精度は劣るものの感染源追求の指標の一つとして利用することができる可能性が認められた。6.O157を用いたPCR法における鞭毛由来抗原H7遺伝子の検出では、625bpのバンドが全ての株で認められた。そのため、病原菌の存在を確認する目的であればPCR法は有用であるが、病原菌の相違を確認するにはRFLP法を行う必要性が明らかとなった。今回の研究により、RFLP法が簡便化され感染源・感染経路追求を行うための手法が容易になり、さらに日数も短縮されたことから、感染看護分野への導入がより行いやすくなったと考えられる。

In the past year, MRSA and O157 were isolated from clinical isolates. RFLP method was used to detect MRSA and O157. This year's results are compared with those of the previous year's results, including specific procedures, comprehensive analysis, and the confirmation of analytical accuracy and correct methods of the RP-PCR method. 1. The time required for the preparation of the bacteria is shortened. 2. Pefabloc protein kinase K inactivation treatment to remove, TE to remove, 1×Wash buffer to remove, the number of days to shorten the test and reduce the trouble. 3. Control enzymes such as Sma I and Xba I 4. Electrophoresis conditions: MRSA voltage 6.0V, 5.3 ~ 34.9 seconds, 20 hours, O157 voltage 6.0V, 1 hour, 4.0 ~ 8.0 seconds, 11 hours, 2 hours, 8.0 ~ 50.0 seconds, 9 hours. 5. MRSA strain was isolated by PCR from mecA gene. MRSA strains were identified by the presence of MRSA and DRU strains. The DNA sequence of this gene is 404bp long and 501bp short. The accuracy of RFLP method is lower than that of other methods, and the probability of using RFLP method is higher than that of other methods. 6. O157 gene was detected by PCR from flagella-derived antigen H7 gene. The purpose of PCR is to confirm the presence of pathogens. In this paper, RFLP method is simplified, and the infection source and infection route are pursued. The method is easy to carry out, and the number of days is shortened. The infection care field is introduced.

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Psychological Characteristics after Far-infrared Hyperthermia Evaluated Using the Profile of Mood State (POMS).

使用情绪状态概况 (POMS) 评估远红外热疗后的心理特征。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Jpn J.Hyperthermic Oncology. 21(4)
影响因子：
0
作者：
YatsuzuKa M.;Wada S.;Hara Y.;Matsui A.;Komai N.;Yasuda T.;Yoshii M.;Tazawa K.
通讯作者：
Tazawa K.

Evaluation of Heat Shock Protein 70 Induced in Spa Therapy with a Simple Thermal : Preliminary Experience.

简单热疗中热休克蛋白 70 的评估：初步经验。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Jpn J.Hyperthermic Oncology. 21(1)
影响因子：
0
作者：
Tazawa K.;Okano S.;Yatsuzuka M.;Yasuda T.;Yoshii M.;Ogawa K.;Ito Y.;Tazawa K.;Wada S.
通讯作者：
Wada S.

セルフモニタリング法を使用した成人型アトピー性皮膚炎患者の掻破行動に関する研究.

使用自我监测方法对成人特应性皮炎患者的抓挠行为进行研究。