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がん細胞およびその遺伝子異常を検出するイメージング分子の開発

开发成像分子来检测癌细胞及其遗传异常

基本信息

批准号：
05J02228
负责人：
山田久嗣
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05J02228/
关键词：
光機能性核酸 DNAメチル化遺伝子変異検出光電気化学

项目摘要

前年度までに、DNA分子内に存在する5-メチルシトシン(mC)塩基のナフトキノン(NQ)増感光-電子酸化を経るDNA鎖の部位選択的切断反応をモニターすることによりmC変異部位を簡便に検出できることを明らかにした。また、より高感度なDNAメチル化検出系へと展開、拡張することを目的として、p53がん抑制遺伝子の部分塩基配列をmC部位で切断調製した実存DNAを標的とするNQ増感光酸化反応を調べるとともに、インベーダー法を改変することにより、メチル化遺伝子の高感度検出システムを構築した。また、改変インベーダー法によるシグナル増幅の結果、サブフェムトモルの微量メチル化DNAを蛍光法により検出し得ることを明らかにした。今年度は、DNA内mC塩基の光電気化学的検出法の開発を目的として、DNA分子内ホール移動を誘起する光酸化機能部位としてアントラキノン(AQ)を選択し、AQ修飾ウリジンならびに3'末端にチオール基を導入した機能性核酸プローブ(AQ-Probe)を合成した。金電極上に固定化したAQ-Probeと制限酵素認識部位にシトシンまたはmCを含む標的DNAを二重鎖形成させ、メチル化感受性制限酵素処理の前後における光電流を直接計測した。その結果、非メチル化二重鎖はメチル化感受性制限酵素の作用によってDNA鎖が切断し、光電流密度が減少することを観測した。他方、メチル化二重鎖の揚合は、DNA鎖切断が起こらず、DNA分子内ホール移動反応に起因する高い光電流応答を保持した。また、p53がん抑制遺伝子の部分配列を検出対象として、酵素処理後の光電流を計測した結果、メチル化二重鎖からは高い光電流密度を観測し得たことから、金電極固定化DNA二重鎖内のホール移動反応特性とメチル化感受性制限酵素処理を併用することにより、標的となるメチル化DNAを光電気化学的手法により検出可能であることを明らかにした。

The previous year's までに, the presence of する5 in the DNA molecule - メチルシトシン (mC) 塩基のナフトキノン (NQ) increased photosensitivity-electronic acidification をThe selected part of the DNA lock is cut off and reversed, and the different parts are easily separated.また、よりHigh sensitivityなDNAメチル検出组へとdevelopment、拡张することをpurposeとして、p53 がんSuppress the remaining part of the hydroxyl group array and cut off the mC site to modulate the した域DNA standard とするNQ increased photoacidification reaction べるとともに、インベーダー methodをchanged することにより, メチル化缝子の高sensitivity検出システムをconstructed した.また, change the result of the インベーダー method, サブフェムトモThe ルのmicronized DNA を蛍光法により検出し得ることを明らかにした. This year, the purpose of this year's research on photoelectrochemical chemistry of mC hydroxyl groups in DNA is the development of photoacidification functional parts within the DNA molecule. AQ-modified ウリジンならびに3' terminal base was introduced into a functional nucleic acid プローブ(AQ-Probe) and synthesized. The AQ-Probe immobilized on the gold electrode and the restriction enzyme recognition site are the same as the target. The DNA double lock is formed and the photocurrent is directly measured before and after treatment with chemoreceptive restriction enzymes. As a result, the action of the non-reduced double-locked chemical-responsive restriction enzyme was cut off, and the photocurrent density was reduced. Other methods include the combination of double locks and the combination of double locks, the cutting of DNA locks, and the movement of DNA intramolecular reaction caused by high photocurrent response and maintenance.また、Partial arrangement of p53 inhibitory residue の子を検出対肖として、Measurement of photocurrent after enzyme treatmentたResults, メチル Double locking からはHigh いphotocurrent density を観measurement たことから, gold electrode immobilized DN A double-locked in-lock mobile reaction characteristics and chemical sensitivity restriction enzyme treatment, combined with することにより, The target DNA chemical method is photoelectronic chemistry, and it is possible to make it possible.