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細胞内おける糖鎖修飾の機能解析用可視化プローブの開発

开发用于细胞内糖基化功能分析的可视化探针

基本信息

批准号：
05J08750
负责人：
藤谷直樹
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

研究課題「細胞内における糖鎖修飾の機能解析用可視化分子プローブの開発」に関する研究を17年度から引き続いて継続した。・O-GlcNAc捕獲分子としてカブトガニ体液由来レクチンTL-2の変異体の作成(β-GlcNAcをKdが222μMで認識)に成功している(17年度)。本年度はO-GlcNAc認識分子プローブに組み込む糖ペプチドの化学合成を主に進めた。糖アミノ酸の合成方法を確立し、電磁波照射環境における糖ペプチドの効率的な固相合成法の検討を行なった結果、高収率で任意の糖ペプチドの合成に成功した。・野生型TL-2はα-GalNAcを強く認識するが生体中にそれはほとんど存在しなく、また、結合力はやや劣るもののα-GalNAcを認識することが過去のデータで明らかになっている。すなわちTL-2の本来のリガンドはα-GalNAcである可能性もあることから、O-GlcNAcよりも広く生体中で存在が認められるムチン型(α-GalNAc)の糖ペプチドの合成を行い、これに成功した。同時に、糖転移酵素を用いた糖鎖伸長にも成功した。・合成した糖ペプチドが特有の立体構造を形成することを核磁気共鳴実験によって明らかにし、その立体構造を決定した。さらに付加する糖の種類や付加する部位によって、ペプチドの立体構造を制御できる可能性が示唆され、O-GlcNAc捕獲分子に組み込むペプチド配列を決定するための大きな知見を得た。・発展型として、再生医療等に注目されているペプチドグリカンのコア構造の合成を行い、その構造解析を行なった。・本年度は前年度に引き続き、上記実験と平行して新たな糖鎖認識タンパク質の探索も行なった。・その結果TL-2と同様、カブトガニ体液から単離された抗菌タンパク質であるタキスタチンBのキチン結合性を確認し、これの立体構造を核磁気共鳴実験によって決定するとともに、キチン認識のメカニズムを解明した。

In the research project, the intracellular sugar repair machine can be parsed to start the experiment with the molecular chemiluminescence method. O-GlcNAc captures molecules and causes of body fluids. (β-GlcNAc, Kd, 222 μ M). The body was successfully made (17). This year's O-GlcNAc intelligence organization focuses on the promotion of sugar and chemical synthesis. The method of synthesis of carboxylic acid is accurate, the method of electromagnetic wave irradiation is effective, and the results of solid phase synthesis are compared, and the results of high-rate synthesis of any kind of glucose are successful. Wild-type TL-2 alpha-GalNAc has strong knowledge about the existence of antigens, antigens, and binding forces in the body of human beings. The results show that there are significant differences between the two groups in terms of molecular weight, molecular weight and binding strength. The possibility of the presence of alpha-GalNAc (α-GalNAc) in vivo, the presence of sugar in vivo (α-GalNAc), and the presence of glucose synthesis in vivo (α-GalNAc). At the same time, glucose transfer enzyme was successfully used to grow the enzyme. The synthesis of sugar is unique to the formation of stereoscopic devices, such as nuclear magnetic resonance (NMR), nuclear magnetic resonance (NMR), and so on. In order to increase the amount of sugar, it is necessary to make a three-dimensional system to control the possibility of the system, and the O-GlcNAc traps are required to determine the accuracy of the information. In the field of development, regenerative medicine, and so on, we should pay attention to the production of synthetic and analytical lines. This year, the previous year and the previous year. The results showed that the results of TL-2 were the same, and the results were consistent with each other. The results showed that the body fluids were the same, and the body fluids were isolated from the body fluid. The results showed that the results were the same, the results showed that the results were the same, the results showed that the results were the same, the results showed that the body fluids were the same, and the antibacterials were detected.