心筋におけるストレス適応から破綻への分子生物学的メカニズムの解明と治療への応用

阐明心肌从应激适应到崩溃的分子生物学机制及其在治疗中的应用

基本信息

批准号：
05J09345
负责人：
山口修
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05J09345/
关键词：
心不全心筋細胞死アポトーシスオートファジー心肥大

项目摘要

(1)ASK1活性抑制が心不全進展に対する抑制効果を持ちうるのか否かを検討するために、心筋症ハムスターに対してASK1ドミナントネガティブ変異体をアデノウイルス随伴ベクターにクローニングし、経冠動脈的に遺伝子導入を行った。ASK1ドミナントネガティブ変異体をアデノウイルス随伴ベクター導入群では心筋細胞アポトーシスが有意に減少しており、左室径の拡大や左室径短縮率の低下が有意に抑制された。また血行動態的にも心機能の低下が抑制された。すなわちASK1活性の抑制が心不全進展に対して抑制効果を持つことが示された。(2)Two-hybrid法によるASK1結合蛋白質同定を行うためのASKΔNをベイトとするコンストラクトを作成し、ASK1下流分子の同定を行った。多数の候補分子が同定され、それらについて心筋細胞死誘導能を指標に機能解析を行った。(3)オートファジーとは酵母から哺乳類まで普遍的に備わる細胞内分解システムである。オートファジーは日常的な細胞内浄化作用に加え、飢餓状態で強く誘導されるためエネルギー供給機構と考えられてきた。その一方で細胞死とオートファジーの関連が注目されているが、細胞死や臓器障害に対して促進的、若しくは抑制的どちらに働いているのかについては議論が分かれてきた。オートファジー必須遺伝子であるAtg5の心筋特異的ノックアウトマウスを作製し、オートファジーが心臓において恒常的な心機能維持ならびにストレス応答時の適応機構として働いていることを明らかにした。

（1）为了调查抑制ASK1活性是否可能对心力衰竭进展产生抑制作用，将心肌病仓鼠克隆到腺病毒伴有载体中，并进行了基因转移。在腺病毒伴随载体中引入ASK1显性阴性突变体的组中，心肌细胞凋亡显着降低，并显着抑制了左心室直径的扩张以及左心室直径减少的减少。还抑制了心动力学的减少。换句话说，这表明抑制Ask1活性对心力衰竭的进展有抑制作用。（2）创建了使用AskΔN作为诱饵的构建体，用于通过两杂化方法识别ASK1结合蛋白，并鉴定出Ask1的下游分子。鉴定了大量候选分子，并使用心肌细胞死亡诱导能力作为指数对它们进行了功能分析。（3）自噬是一种细胞内降解系统，它是从酵母到哺乳动物的普遍配备的。除了每日细胞内纯化效果外，自噬也被认为是一种能源供应机制，因为它在饥饿中被强烈诱导。另一方面，细胞死亡与自噬之间的关系引起了人们的关注，但是关于它是否在与细胞死亡和器官损害有关的启动子或抑制方式上起作用存在广泛的争论。我们为ATG5创建了心肌特异性敲除小鼠，ATG5是一种必不可少的自噬基因，并揭示了自噬是维持心脏稳态心脏功能和在压力反应期间适应的机制。