非アポトーシス型細胞死変異株の分離とその分子機構の解析

非凋亡细胞死亡突变体的分离及其分子机制分析

• 批准号: 05J09346
• 负责人: 遊佐 宏介
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05J09346/
• 关键词: アポトーシス; オートファジー; ブルーム症侯群; Bak; Bax; ブルーム症候群

プロブラム細胞死は、個体の形態形成や恒常性維持に必須の機能である。ミトコンドリアにおけるアポトーシス促進因子Bax,Bak二重変異マウスの解析においてp53依存性のアポトーシスが阻止されることが報告されていたが、当研究室での詳細な解析の結果、実際にはオートファジー様細胞死が誘導されていることが見いだされた。オートファジーの分子機構の解析は出芽酵母変異体の解析により、大きな進展を見せた。近年マウスを用いた解析が進み、オートファジーはほ乳類においても必須であり、様々な生命現象や疾患と関連する証拠が示されている。例えば、神経変性疾患や心臓疾患との関連が示されており、細胞が細菌に感染した後オートファジーを誘導し細菌の増殖を抑えようとすることや、さらに老化との関連性も指摘されている。一方、オートファジーのほ乳類での分子機構は未知の部分が大きい。本研究では、Bax,Bak二重変異と両アレル変異を導入できるBloomシステム(nature,429:896)とを組み合わせ、オートファジー様細胞死変異株を分離し、関連遺伝子のスクリーニングを行うことを目的とした。前年度までに作製したBloom-Bak KO ES細胞へ、更にBax変異を導入した。前年度、Bax遺伝子座には多数の一塩基変異があることがわかったので、ターゲッティングベクターをC57B16Jと129SvJゲノムを用いて二種類構築した。ジーンターゲッティングの結果、Baxホモ欠損ES細胞を得る事ができた。Bak,Bax二重変異マウスが生存可能であるように二重変異ES細胞も正常に増殖する。すでに、変異導入するためのレトロウイルスは作製しているので、今後二重変異細胞において効率のいいオートファジー様細胞死誘導数系を構築する必要が有る。また、今年度、Bloomシステムの有効性を更に示すため、作製した変異導入レトロウイルスを用いて、ES細胞の未分化性に関するスクリーニングを行った。現在までに、ホモ欠損で未分化維持機構に関連すると思われる候補遺伝子を得た。これは、Bloomシステムを用いない場合には分離できなかったので、Bloomシステムが遺伝子探索ツールとして有効である事を示していると考えられる。

Cell death, individual morphogenesis, and the maintenance of constancy are essential functions. Bax,Bak double variation analysis of p53 dependence on the promoter, and report on the results of detailed analysis in the laboratory. Analysis of molecular structure of yeast and yeast In recent years, it has been used to analyze and analyze the relationship between life phenomena and diseases. For example, the relationship between neurologic and cardiac diseases is shown in the following ways: cell infection, induction, bacterial colonization, inhibition, aging, etc. The molecular structure of a protein is unknown. In this study, we introduced the Bloom pattern (nature,429:896) into the cell culture system to isolate and correlate the cell culture system. In the previous year, Bloom-Bak KO ES cells were produced and Bax cells were introduced. In the past year, Bax gene loci have been used for most of the two types of structures. The result of the test was that Bax failed to damage ES cells. Bak,Bax double heteromorphic ES cell proliferation It is necessary to construct a cell death-inducing system for the induction of cell death in the future. This year, Bloom cells have been shown to be able to control the differentiation of ES cells, and ES cells have been shown to be able to differentiate. Now, if you want to maintain the integrity of the organization, you can think of a candidate. In this case, the Bloom system is used to separate and explore the information.