パーキンソン病におけるα-synucleinと酸化ストレスの共同作用機序

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昨年度の研究によりHNEのα-synuclein付加サイトを決定する為、リコンビナントwild type α-synucleinを作製し、in vitroにてHNEと反応させ、抗α-synuclein抗体と抗HNE抗体を用いて、western blottingでα-synucleinの凝集を確認し、MS及びMS/MSにて一個の付加サイト(H50)を見つけた。又、wild type α-synucleinと同様、H50Rのmutant蛋白質を作製、H50Rとlysine(K)からarginine(R)に変化した15種類のdouble mutant蛋白質を作製した。α-Synucleinに含まれた15個のlysine残基の中、少なくとも一ヵ所はH50Rと共働き、HNEの付加複合体が形成されていることを推測した。それぞれの蛋白質はwild type α-synuclein、H50R α-synucleinと同様、HNEとin vitro反応をした。結果として、明らかな変化を見つけられなかった。今年度では、Lysine同土はHNEと付加複合体が形成されていることを推測した。同じsynucleinfamilyであるβ-synucleinとHNEのin vitro反応を調べた。β-Synucleinの中、Q50でありながらもα-synucleinと同様にHNEによる凝集パターンを示したことで、H65はHNEに対し、β-synucleinの一つの修飾サイトと考えた。又、α-SynucleinのH50とβ-synucleinのH65との間に存在しているK58とK60は最も付加複合体形成に参与する可能性が高いと考えた。これを確認するため、K58R、K60Rα-synuclein蛋白質を作製したが、的確なbinding siteは見つからなかった。更に、K58R及びK60R以外のmutant α-synuclein蛋白質を作製し、K60R及びK58R以外のmutantα-synuclein蛋白質を作製したが、H50Rα-synucleinと同様、HNEとin vi tro反応をした。結果として、明らかな変化を見い出せなかった。Lysine同土はHNEとの付加複合体が非常に不安定と考えられる。上記の結果は、研究代表者により、10^<th>International Congress of Parkinson' s Disease andMovement Di sordersで発表された。同大会ではパーキンソン病及その他の神経変性疾患についての最新研究情報並びに資料を収集した。同時に、α-synucleinに関する類似分野の研究を行っている先進レベルの外国の諸先生と打ち合わせ、本年度の研究状況を確認、それらを踏まえて、今後の共同研究について話し合った。これからは追加実験を行うと共に、これまでの研究成果を論文に纏める予定である。