温度応答性培養皿への遺伝子固定化と熱刺激による界面からのデリバリー制御

基因固定在温度响应培养皿上并使用热刺激控制界面的递送

• 批准号: 16700369
• 负责人: 武田 直也
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: Waseda University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16700369/
• 关键词: 遺伝子導入; 温度応答性; 高分子; 界面; 細胞基底面

温度に応答して相転移を起こすN-isopropylacrylamide(IPAAm)を主として、カチオン性と疎水性の3つのユニットからなる直鎖状のランダム共重合体(IP-20D-10B)について、293細胞に対する遺伝子導入効率を評価した。導入する遺伝子には、GFPをコードしたプラスミドDNAを用いた。まず定法の培地に添加する方法でIP-20D-10B/DNA複合体を293細胞に加えた所、confluentで細胞分裂が抑制された状態であっても40%程度(t=4d)の高い遺伝子導入効率が得られた。続いて、IPAAmにカルボキシル基を導入した誘導体(CIPAAm)を合成し、IPAAmとCIPAAmを培養基材表面に電子線でグラフトして、温度応答性培養皿を作製した(CIPAAmのモル分率は1,3,5%)。ここに、正電荷過剰のIP-20D-10B/DNA複合体を静電的に固定し、さらに293細胞を播種して細胞の基底面からの遺伝子導入を試みた。CIPAAmのモル比の増大に伴って細胞接着性が低下し、5%CIPAAm培養皿では培養1日目で細胞の凝集が観測された。遺伝子の導入効率は、0、01%以下ときわめて低かった。そこで、接着性の強いretinal pigment epithelial cellに細胞種を変えて同様に検討を行なったが、遺伝子導入はほとんど観察されなかった。しかしながら、IPAAm/CIPAAm温度応答性培養皿では、IPAAm単独の培養皿と比較して温度変化による細胞の回収が容易となることが見出された。本研究における細胞培養表面へのDNAの固定化量は、産総研の遺伝子導入アレイやNorth western Univ.のSheaらと比較して、1/10〜1/100であった。よって、遣伝子導入効率の改善にはDNA固定:量の増大が必要と考えられる。

Temperature-sensitive N-isopropylacrylamide (IPAAm) is the main component of N-isopropylacrylamide (IPAAm), and its properties are water-based. Evaluation of the introduction efficiency of のユニットからなるstraight-locked のランダム (IP-20D-10B) and 293 cells. Import する伝子には, GFPをコードしたプラスミドDNAを用いた. IP-20D-10B/DNA complex, IP-20D-10B/DNA complex, 293 cells added, confl The cell division inhibition state has reached 40% level (t=4d), and the efficiency of the introduction of the enzyme has been improved.続いて、IPAAmにカルボキシルbasedをIntroduction of the inducer (CIPAAm)をSynthesisし、IPAAmとCIPAAmをThe surface of the culture substrate is made of electronic wire and temperature-responsive petri dishes (CIPA Am のモル 1,3,5%). The IP-20D-10B/DNA complex with positive charge was electrostatically immobilized, and the 293 cells were seeded and the cells were seeded into the basal surface and the test was carried out. The size of CIPAAm is larger than that of the cells and the cell adhesion is lowered. The cells can be agglutinated after being cultured in a culture dish with 5% CIPAAm for 1 day. The import efficiency of the remaining parts is は, 0, 01% or less, and it is low.そこで、retinal pigment epithelial with strong adhesive properties The cell type is the same as the cell type.しかしながら, IPAAm/CIPAAm temperature-responsive culture dish では, IPAAm single culture dish と comparison して temperature change による cell recovery が となることが见出された. In this study, the amount of DNA immobilized on the cell culture surface was determined, and the amount of DNA immobilized on the surface of the cell culture was introduced into the North Western Univ. To improve the efficiency of DNA introduction and DNA fixation, it is necessary to increase the amount of DNA.