石油汚染環境の高効率バイオレメディエーション技術の開発

本研究では、昨年度、石油分解微生物群集内で多環芳香族炭化水素(PAHs)の分解に寄与している細菌群を同定するために、自然海水(10^6cells/ml程度の土着細菌を含む)を植種源(培地)とし、原油の芳香族画分あるいはPAHs(フェナンスレン等)のバイオスティミュレーション条件下(無機態の窒素、リンを添加)での分解実験を行い、分解微生物群集の菌叢構造を解析した。その結果、PAHsの分解に伴い、Cycloclasticus属細菌の優占化が確認された。今年度は、PAHs分解菌のCycloclasticusの単離を行い、石油分解能や増殖特性の調査を調査を行って、分解群集内においてPAHs分解細菌の選択的ポピュレーション制御を行うための技術開発を行った。フェナンスレンを炭素源とした希釈培養を行い、PAHs分解細菌を集積化させ、フェナンスレンを単一炭素源とする平板プレートよりコロニー単離を行うことで、数株のCycloclasticus属細菌の単離に成功した。単離したCycloclasticus属細菌の無機栄養塩要求性評価の結果、窒素、リンに加え、鉄を添加することで増殖が促進されることを明らかにした。また、単離したCycloclasticus属細菌の16S rRNA遺伝子配列を決定し、Cycloclasticusの特異的検出が可能な遺伝子プローブを開発した。鉄添加の有無がCycloclasticusの増殖に及ぼす影響を評価するために、自然海水を培地に用いた原油芳香族画分のバイオスティミュレーション条件下(窒素、リンを添加、鉄は添加系と無添加系の2系列を設定)での分解実験を行った。その結果、窒素、リンに加え鉄の添加を行った系では、明らかにCycloclasticus属細菌の増殖が顕著であり、その結果PAHsの分解が促進されることが明らかになった。

本研究では、昨年度、石油分解微生物群集内で多環芳香族炭化水素(PAHs)の分解に寄与している細菌群を同定するために、自然海水(10^6cells/ml程度の土着細菌を含む)を植種源(培地)とし、原油の芳香族画分あるいはPAHs(フェナンスレン等)のバイオスティミュレーション条件下(無機態の窒素、リンを添加)での分解実験を行い、分解微生物群集の菌叢構造を解析した。その結果、PAHsの分解に伴い、Cycloclasticus属細菌の優占化が確認された。今年度は、PAHs分解菌のCycloclasticusの単離を行い、石油分解能や増殖特性の調査を調査を行って、分解群集内においてPAHs分解細菌の選択的ポピュレーション制御を行うための技術開発を行った。フェナンスレンを炭素源とした希釈培養を行い、PAHs分解細菌を集積化させ、フェナンスレンを単一炭素源とする平板プレートよりコロニー単離を行うことで、数株のCycloclasticus属細菌の単離に成功した。単離したCycloclasticus属細菌の無機栄養塩要求性評価の結果、窒素、リンに加え、鉄を添加することで増殖が促進されることを明らかにした。また、単離したCycloclasticus属細菌の16S rRNA遺伝子配列を決定し、Cycloclasticusの特異的検出が可能な遺伝子プローブを開発した。鉄添加の有無がCycloclasticusの増殖に及ぼす影響を評価するために、自然海水を培地に用いた原油芳香族画分のバイオスティミュレーション条件下(窒素、リンを添加、鉄は添加系と無添加系の2系列を設定)での分解実験を行った。その結果、窒素、リンに加え鉄の添加を行った系では、明らかにCycloclasticus属細菌の増殖が顕著であり、その結果PAHsの分解が促進されることが明らかになった。