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微生物由来細胞認識・破壊タンパク質(Parasporin)に関する研究

微生物来源的细胞识别和破坏蛋白（Parasporin）的研究

基本信息

批准号：
17780067
负责人：
浴野圭輔
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Sojo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

BT A11OO株由来の精製Parasporinから部分配列情報を得、本タンパク質の遺伝子クローニングを行った。その結果、構造遺伝子全長920bpを含む約3.4kbの遺伝子断片を取得した。現在BT由来の細胞認識・破壊タンパク質は配列の相同性からParasporin1から4の4種類に分類されているが、本タンパク質はこれらのいずれとも異なる全く新規なParasporinであることが明らかとなった。また、相同性検索の結果においてもデータベース上に相同性を示すタンパク質の情報は得られなかった。本タンパク質は約34kDaの前駆体タンパク質として発現され、ProteinaseKの作用によりC末端側約4kDaがプロセシングされではじめて細胞破壊活性を示すことが明らかとなった。また、本タンパク質の構造遺伝子の上流にはBacillus anthracisのキチン結合タンパク質と51.3%の相同性を示す遺伝子が存在し、Parasporin遺伝子とオペロン構造をとっていることが示され、本タンパク質と何らかの相関があることが示唆された。次に、本タンパク質の大腸菌による発現を行った。宿主発現系に大腸菌BL21(DE3)とpET32bを用い、前駆体タンパク質として発現を行った。その結果、目的タンパク質は封入体として発現されたため、尿素による可溶化と段階的透析による尿素除去によりリフォールディンゲを行った。この組換えタンパク質をProteinaseK処理することにより、白血病細胞であるmolt-4に対して細胞の破壊活性を確認した。しかしながら、活性型として発現させたタンパク質には細胞破壊活性は確認できなかった。

BT A11OO strain origin refined Parasporin to obtain partial alignment information, the original quality of the gene to obtain information The results show that the structural gene is 920bp in length and contains about 3.4 kb of gene fragments. Now BT comes from the cell understanding, break the quality of the anti-alignment of the identity, from Parasporin1 to 4 kinds of classification, from the quality of the anti-alignment. The result of the identity search is that the identity of the information is displayed on the screen. This protein is about 34kDa precursor protein, protein production, protein K action, C-terminal about 4 kDa precursor protein, protein production, cell destruction activity. The similarity of 51.3% of the original quality of the structural heritage of Bacillus anthracis shows that the genetic heritage exists, and the original quality of the structural heritage shows that the genetic heritage exists. The secondary, primary and secondary coliform organisms were detected. The host development system is E. coli BL21 (DE3) and pET32b. As a result, the objective of the material encapsulation has been achieved. It is necessary to perform solubilization of urea and removal of urea during staged dialysis. The cell lysis activity of leukemic cells treated with Proteinase K was confirmed. The activity type was detected and the cell-breaking activity was confirmed.