網膜神経細胞の虚血・再潅流傷害時に観察される細胞周期の異常回転と細胞死との関係

视网膜神经元缺血/再灌注损伤过程中细胞周期轮转异常与细胞死亡的关系

基本信息

批准号：
17790174
负责人：
坂本謙司
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790174/
关键词：
薬理学脳神経疾患シグナル伝達

项目摘要

7〜8週齢のSD系雄性ラットをケタミン(90mg/kg)+キシラジン(10mg/kg)で麻酔し,電気毛布で体温を37℃に維持した.片眼の前眼房に,ラットの眼の位置から約175cmの高さの位置に置いた生理食塩水入りのタンクと接続した注射針を刺入し,眼内に130mmHgの圧力を負荷し,網膜虚血を誘発した.網膜虚血を60分間負荷した後,前眼房から注射針を抜くことにより再灌流した.反対側眼は無虚血対照とした.無虚血対照および再灌流24時間後の網膜組織を採取し,ウエスタンブロットによってサイクリンD1,cyclin-dependent kinase(CDK)2,4およびp16やp27などのCDKインヒビタータンパク質をはじめとする細胞周期調節因子の発現量の変化を検討したところ,再灌流24時間後の網膜組織では,無虚血対照と比較し,サイクリンD1およびCDK4の発現が増加しており,また,p16およびp27の発現が減少していることが明らかとなった.この結果から網膜虚血・再灌流傷害にCDKの活性化による細胞周期の異常進行が関与している可能性が考えられたので,次に,CDK阻害薬が網膜虚血・再灌流傷害に与える影響を検討した.同様の方法でラットに網膜虚血・再灌流を負荷し,再灌流7日後に眼球を摘出した.固定後,パラフィン包埋し,薄切組織切片を作成する.再灌流7日後に摘出した眼球の切片はH-E染色を行い,神経細胞の脱落を評価した.虚血15分前にCDK阻害薬であるロスコビチン(3mg/kg)やCDK4 inhibitor(1mg/kg)を投与した群と溶媒を投与した群とを比較したところ,これらのCDK阻害薬は網膜虚血・再灌流により惹起される視神経細胞死を抑制することが明らかとなった.

用氯胺酮（90 mg/kg） +甲基嗪（10 mg/kg）麻醉7-8周大的雄性SD大鼠，并用电毯将温度保持在37°C。一只眼睛的注射针连接到大鼠眼睛上方约175厘米的盐水罐中，并向眼睛施加130 mm Hg的压力以诱导视网膜缺血。经过60分钟的视网膜缺血后，通过从前腔中提取针头，将针头染色。对侧眼被用作非缺血控制。收集24小时后，非缺血性控制和视网膜组织被收集，并通过蛋白质印迹依赖细胞周期蛋白。我们研究了细胞周期调节剂的表达水平的变化，包括激酶（CDK）2、4和CDK抑制剂蛋白，例如p16和p27，并透露，在再灌注后24小时，视网膜组织中Cyclin D1和CDK4的表达增加了，并且与P16和P27的表达相比，与ISCHEPTICS的表达降低了。该结果表明，由视网膜缺血和再灌注损伤引起的细胞周期异常。人们认为可能涉及进展，因此我们接下来研究了CDK抑制剂对视网膜缺血和再灌注损伤的影响。使用相同的方法对大鼠进行视网膜缺血和再灌注，并在再灌注后7天去除眼球。固定后，制备了石蜡包裹和薄的组织切片。再灌注后7天染色，对移除的眼球的部分进行了染色，并评估了神经元丧失。缺血前15分钟，Roscovitine（3 mg/kg）和CDK4用于抑制CDK抑制剂。当比较施用的抑制剂（1mg/kg）与抑制剂的组进行比较时，发现这些CDK抑制剂抑制视网膜缺血和再灌注引起的视神经细胞死亡。

项目成果

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Inducible nitric oxide synthase inhibitors abolished histological protection by late ischemic preconditioning in rat retina.

DOI：
10.1016/j.exer.2005.08.011
发表时间：
2006-03
期刊：
Experimental eye research
影响因子：
3.4
作者：
K. Sakamoto;Yuzuru Yonoki;Y. Kubota;M. Kuwagata;M. Saito;T. Nakahara;K. Ishii
通讯作者：
K. Sakamoto;Yuzuru Yonoki;Y. Kubota;M. Kuwagata;M. Saito;T. Nakahara;K. Ishii

Involvement of the betagamma subunits of G proteins in the cAMP response induced by stimulation of the histamine H1 receptor.

G 蛋白的 betaamma 亚基参与刺激组胺 H1 受体诱导的 cAMP 反应。