インスリンシグナル伝達における低分子量GTP結合蛋白質の機能解析

低分子量 GTP 结合蛋白在胰岛素信号传导中的功能分析

• 批准号: 17790210
• 负责人: 上田 修司
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790210/
• 关键词: インスリン; Rac; L6; グアニンヌクレオチド交換因子

インスリンによる血糖値降下作用は,糖輸送担体(GLUT4)の細胞膜への移行促進によって起こる。我々は,骨格筋のGLUT4の細胞膜移行の制御にアクチン細胞骨格を調節するRhoファミリー低分子量GTPaseが関与していると仮説を立て、検討している。18年度は、GLUT4にタグ配列を挿入したGFP-GLUT4-Mycを安定発現する分化効率が非常に高いL6細胞株を新に作製した。これを用いて、17年度に明らかにしたインスリン刺激で強く活性化されるRhoファミリーのRac1の機能解析を行った。筋管に分化誘導後のL6細胞にRac1の恒常的活性型変異体を、アデノウィルス発現システムを用いて過剰発現させ検討したところ、活性型Rac1はインスリン刺激と同様にアクチン細胞骨格の再構成を伴うGLUT4の細胞膜移行を強く促進した。RNAi干渉法によるRac1のノックダウンによって、L6細胞のインスリン刺激依存的なGLUT4の細胞膜移行が抑制される事から、我々はこれらの結果を個体レベルで更に検証するため、Cre/loxPシステムを用いてRac1の骨格筋特異的なノックアウトマウスを作製した。筋肉クレアチンキナーゼのプロモーター下流でCreを発現するトランスジェニックマウス(MCK-Cre)とRac1のfloxマウスを掛け合わせて、Rac1(flox/flox : MCK-Cre)マウスを作製し、後肢筋を調べたところ、タンパク質レベルでRac1の発現が著しく減少している事を確認した。

In addition, the glucose lowering effect of glucose transporter (GLUT4) is the promotion of cell membrane migration. In this paper, we discuss the regulation of cell membrane migration of GLUT4 in bone marrow cells, and the relationship between Rho and low molecular weight GTase. In 2018, the GLUT4-Myc cell line was newly developed with a very high differentiation rate. The function analysis of Rac1 was carried out in 17 years. After induction of tendon differentiation, the constant active type of Rac1 in L6 cells was stimulated by the same stimulation, and the cell membrane migration of GLUT4 was strongly promoted. RNAi interference method is used to inhibit the cell membrane migration of Rac1, L6 cells and stimulus-dependent GLUT4 cells. The occurrence of Cre, Rac1(flox/flox : MCK-Cre) and Rac 1 flox is confirmed.