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GCKファミリーキナーゼ(MAPKKKキナーゼ)による細胞接着制御機構の解明

阐明 GCK 家族激酶（MAPKKK 激酶）的细胞粘附控制机制

基本信息

批准号：
17790215
负责人：
海川正人
金额：
$ 1.79万
依托单位：
University of the Ryukyus
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790215/
关键词：
Rap2 TNIK 細胞間接着細胞接着

项目摘要

ras癌遺伝子産物(Ras)の類縁分子低分子量G蛋白質Rap2に特異的標的蛋白質として3つのプロテインキナーゼ(HGK、TNIK、MINK)を単離・同定している。本研究ではTNIKの結合蛋白質および、リン酸化標的蛋白質の検索を行ない、TNIKの細胞接着装置に対する作用の解析を行った。これまでに、TNIKのGST融合蛋白質を固相化したアフィニティーカラムを用いてラット脳の膜抽出蛋白質画分からTNIK結合蛋白質を複数精製している。それらTNIK結合蛋白質のうちDrosophila rolling pebbles (rols)のラットホモログであるp190に着目し、TNIKとの関連を解析した。精製したp190の特異的抗体を用いて培養ケラチノサイト細胞におけるp190の局在を解析したところ、TNIKと同様に細胞間接着部位に集積している事が明らかになった。次いで、p190の遺伝子をクローニングして培養細胞に発現させたところ、導入したp190はTNIKと共に発現させるとリン酸化が亢進し、細胞間接着部位から細胞質分画に局在が変化することが明らかになった(投稿準備中)。また、組み換えレトロウイルスを用いて、TNIKの発現をテトラサイクリンにより誘導できるマウスの上皮系細胞株を樹立し細胞機能の解析を行った。TNIKの発現を誘導すると、細胞間接着が破壊され、コロニーが形成されなくなり、個々の細胞に葉状突起の形成がみられた。キナーゼ部位に変異を持つTNIKの発現を誘導した細胞では細胞間接着には変化はみられなかった。以上の事より、TNIKは細胞間接着の維持、解離といった細胞間接着の制御に関与しており、p190はTNIKによる制御を受け、それらの機能に関係している可能性が示唆された。

Ras oncogenic gene product (Ras) is a specific target protein of the low molecular weight G protein Rap2, which is a low molecular weight G protein, and is a specific target protein. This study focuses on the analysis of TNIK's binding protein, the analysis of the action of TNIK's cell-attaching device, and the analysis of the action of TNIK's cell-attaching device. TNIK's GST fusion protein solid-phase solid phase Protein extraction was performed using a TNIK membrane and TNIK bound proteins were purified.それらTNIK binding proteinのうちDrosophila rolling pebbles (rols)のラットホモログであるp190に目し、TNIKとのassociatedをanalyticsした. Purified antibodies specific to p190 were used to culture the p190 cells in human cells.をANALYSIS したところ, TNIK と Same 様に inter-cell junction にassemble している事が明らかになった. Sub-いで、p190の缝子をクローニングしてCultivated cellsに発appearsさせたところ、Introduction p190はTNIKと公に発appear The acidification of させるとリン is enhanced, and the cell-to-cell contact site and the cytoplasmic separation are in the が変化することが明らかになった (preparing for submission).また, group み change えレトロウイルスをいて, TNIK の発行をテトラサイクリThe ンにより induced できるマウスの epithelial cell line was established and the analysis of cell function was carried out. TNIK's appearance is induced, cell-to-cell connection is broken, cell-to-cell formation is induced, and individual cells are formed into leaf-like protrusions. The キナーゼ parts are different and the TNIK is induced, and the cells are induced, and the cells are directly transformed and the cells are transformed. The above mentioned things are the maintenance and dissociation of the cell-to-cell connection, TNIK and the control and control of the cell-to-cell connection. , p190 は TNIK によるを Receive けそれらの FUNCTION に RELATION している POSSIBILITY が INDICATION された.