神経幹細胞におけるサイトメガロウイルス感染感受性とサイクロフィリンの役割

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1.サイクロフィリンAとHDAC蛋白たの関連検索サイクロフィリンA(CyPA)とサイクロフィリンB(CyPB)に特異的なsiRNAを用いて内因性CyPA, CyPBの発現を低下させたところ、神経幹細胞においてCyPA発現低下のみがMCMV感染抑制を引き起こした。CyPAとの結合蛋白を調べるために、神経幹細胞のlysateを準備した。CyPA-GST融合蛋白を作成し、神経幹細胞のlysateを用いてGST-pull downをおこなった。分離精製後、蛋白質複合体をSDS-PAGEで分離し、western blotting法にてHDAC2抗体で染色した。Western blottingの結果、CyPA蛋白とHDAC2蛋白が結合することが確認できた。現在、CyPA蛋白と結合するウイルス蛋白や他のホストの蛋白を確認するため、感染細胞1ysate特異的に検出された未知のバンドを回収し、プロテアーゼ消化、プロテアーゼ切断してできたペプチドをプロテインシークエンスサーにて配列の解析を試みている。2.データの総括と論文作成::データを総括し、論文を作成した。3.論文投稿:論文を投稿し、現在revise中である。4.MCMV脳潜伏感染マウスの作成C57BL/6マウスまたはBALB/cマウス新生児脳内にlacZを発現する変異ウイルス(RM453)を感染させ、脳内にCMV潜伏感染したマウスを作成する。感染後4-6ヶ月後に神経細胞移植実験のrecipientとして用いた。5.BALB/cマウスとC57BL/6マウスとラットより神経幹細胞を採取・培養同種問、異種間神経幹細胞移植を成立させるため、BALB/c, C57BL/6マウス、ラットの新生児またはadultより神経幹細胞を採取培養する。EGF, FGF存在下で継代培養を行い、neuron, glia,01igodendrocyteへの3系統の細胞への分化を確認する。同種または異種間神経幹細胞移植後の脳に潜伏感染したMCMVが再活性化してくるか否かを現在検討中である。