Dbf4/Cdc7によるS期チェックポイント制御機構の解明

Dbf4/Cdc7 阐明 S 相检查点控制机制

• 批准号: 17790269
• 负责人: 千葉 卓哉
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790269/
• 关键词: 細胞周期; DNA傷害; シグナル伝達; チェックポイント

1.DNA傷害時におけるDbf4/Cdc7のリン酸化の解析(1)DNA傷害によるDbf4のリン酸化とATM/ATRとの関連ATM/ATR過剰発現細胞をもちいてIR(20Gy),UV(50J/m2),HU(1mM,24hrs),etoposide(50μM,24hrs)処理後のDbf4のリン酸化をSDS-PAGEにより解析した。その結果これらのDNA傷害誘導処理とATM/ATRの過剰発現を組み合わせることによりDbf4のリン酸化が増強される可能性を示唆する結果が得られた。(2)ATM/ATRによるDbf4のリン酸化部位の解析Dbf4には7つのATM/ATRによるリン酸化のコンセンサス配列(S/TQ)が存在する。GST融合タンパクを作製し、site-directed mutagenesisによりアラニン変異体を作製しATM/ATRによるリン酸化部位を同定した。その結果、5つのSQ/TQ部位がATM/ATRによるリン酸化の標的である可能性が示唆された。その他の2カ所については継続して解析している。2.Dbf4のリン酸化変異体および抗リン酸化抗体の作製同定した5つのリン酸化部位をアラニン(A ; phospho-negative)またはグルタミン酸(D ; phospho-mimic)に変異させ、表現型解析にもちいるDbf4の全長を含むFlagタグプラスミドを作製した。上記のATM/ATRによるリン酸化部位に対する特異抗体を数種類作製した。このうちN末端付近のSQを認識する抗体を用いてin vivoにおけるDbf4のリン酸化の機能解析を行っている。

Analysis of 1.DNA-induced Dbf4/Cdc7 acidification: (1) DNA-induced Dbf4-induced acidification, ATM/ATR-induced ATM/ATR, cytopathic acid-induced IR (20Gy), UV (50J/m2), HU (1mm Magne24hrs), etoposide (50 μ M, 24hrs), Dbf4-induced acidification, SDS-PAGE after treatment. The results showed that the possibility of DNA acidification and acidification was not satisfactory. The results showed that the results were not satisfactory. (2) ATM/ATR Dbf4 acidified sites Dbf4 7 ATM/ATR acidified sites acidified compounds S/TQ exists. GST fuses the same acidified parts of the body as the same as that of the site-directed mutagenesis and the ATM/ATR parts. The results showed that the possibility of ATM/ATR acidification at the SQ/TQ site was significantly higher than that of the control group. I don't know what he