ゲノム情報を利用したサルモネラIII型分泌機構エフェクターの網羅的同定と機能解析

利用基因组信息全面鉴定沙门氏菌III型分泌机制效应子并进行功能分析

• 批准号: 17790292
• 负责人: 三木 剛志
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790292/
• 关键词: 細菌; ゲノム; III型分泌機構; シャペロン

ゲノム情報を用いたコンピューター解析および、これまでに報告されているエフェクターの特徴的な発現調節と構造より、サルモネラIII型分泌機構のエフェクター分子をコードすると予想される9つの遺伝子を同定した。これらのエフェクター候補分子のIII型分泌機構依存性の分泌および宿主細胞内移行性について、標識タグが付加した融合エフェクター候補たん白質を抗タグ抗体により検出する方法および百日咳菌の毒素であるCyaAたん白質の酵素ドメインとの融合エフェクターたん白質における宿主細胞内移行依存性の酵素活性を検出する方法により検討したが、いずれの候補エフェクターにおいても分泌および移行性は認められなかった。そこで、これらのエフェクター候補分子の病原性発現における役割について調べることを目的として、これら遺伝子の破壊株を作製し、マウスを用いた感染実験を行った。その結果、ssaE遺伝子の破壊株において著しい病原性の低下が認められたため、ssaE遺伝子にコードされるSsaEの機能解析を行った。ssaE遺伝子はIII型分泌機構の遺伝子と同様の転写パターンを示し、SsaEは酸性等電点を示す推定分子量9.4kDaのたん白質であった。また、構造的な特徴として、たん白質-たん白質相互作用に重要である3つのコイル-コイルドメインを保持しており、ssaE遺伝子の破壊株では、III型分泌機構エフェクターの分泌が認められなかったことから、SsaEはエフェクターの分泌に関わるたん白質と相互作用するシャペロンであると予想した。Pull-down法によりSsaEと相互作用する因子を調べた結果、SsaEはC末端側に存在するコイルーコイルドメインを介して、エフェクターの宿主細胞移行性に関わるトランスロケースであるSseBと特異的に結合することが明らかとなった。さらに、ssaEの破壊株ではSseBの菌体内の発現量および安定性の変化は認められなかったが、分泌、すなわちトランスロケースとしての機能が消失することを見いだした。これまでに、SseBの安定性に関与するシャペロンとして、SseAが同定されている。さらに、近年になりIII型分泌機構のシャペロンは安定性に関わる機能に加え、分泌性に対しても影響を及ぼすことが報告されている。本研究より初めて、トランスロケースの分泌には安定性に関与するシャペロンではなく、他のたん白質が必要であることが明らかとなった。

ゲノムInformation を Use いたコンピューター to analyze および, これまでに report されているエフェクターの特徴’s な発成とStructure of the より, サルモネラ type III secretion mechanism のエフェクターmolecule をコードすると yu want to される9つの伝子を同定した.これらのエフェクターCandidate molecule type III secretion mechanism dependence のsecretion および Intrahost cell migration について、Identification タグがaddしたfusionエフェクター candidate たんwhite matter をanti-タグantibody により検出する method およびpertussis bacteria のtoxin であるC yaA white matter enzyme ドメインとのfusion enzyme activity を検The way out of the problemターにおいても secretion および migratory はcognize められなかった.そこで、これらのエフェクターCandidate molecule のpathogenic 発appear における丫开について Adjust べることをpurpose として, これら伝子の波壊 strains をmaking し, マウスを用いた infected 実験を行った.そのRESULTS, ssaE 伝子の壊 strains において出しい pathogenicity のlow がidentificationめられたため、ssaE缝子にコーされるSsaEの Function Analysisを行った. The type III secretion mechanism of ssaE is a type III secretion mechanism, and the acidic isoelectric point of SsaE is a white matter protein of 9.4 kDa.また、structural な特徴として、たんwhite matter-たんwhite matter interaction is importantである3つのコイル-コイルドメインをKEEP しており、ssaE伝子の波壊抧は、III type secretion mechanism, secretion mechanism, secretion mechanism, secretion mechanism The secretion of ェクターの口わるたんwhite matter and the interaction of するシャペロンであるとyuthinkした. Pull-down method, SsaE and interaction factor, adjust the result, SsaE and C-terminal side exist, SsaE and C-terminal side exist. The host cell migration of the host cellースであるSseBとSpecial に合することが明らかとなった.さらに, ssaE's broken strain, SseB's in-bacterial body's current amount, stability, and stability.なかったが, secretion, すなわちトランスロケースとしての Function が disappears することを见いだした. The stability of これまでに and SseB are the same as the stability of するシャペロンとして and SseA.さらに、In recent years, the stability of になり type III secretion mechanism のシャペロンは に关わるFunctional function, secretory effect, and secretion report. This study is about the stability and stability of the secretion and secretion of Toro noru, Toro no スロケースャペロンではなく、他のたん白性が必であることが明らかとなった.