Tリンパ球の分化・選択・アポトーシス制御におけるIANファミリーの役割

機能未知のGTP結合タンパクであるIANファミリー分子群に着目し、Tリンパ球の分化と生存制御におけるそれらの役割について、解析を行った。(1)IANファミリー分子とBcl-2ファミリー分子間の相互作用GFP融合タンパク質と共焦点レーザー顕微鏡を用いた観察、および細胞抽出物の分画法により、IAN4とIAN5がミトコンドリアおよび小胞体に局在することを明らかにした。兔疫共沈降法を用いて、Tリンパ球におけるIAN4、IAN5とBcl-2ファミリー分子の相互作用を明らかにした。また、IAN5遺伝子のノックダウンによるTリンパ球細胞のアポトーシスの亢進が、Bcl-xLの過剰発現によって抑制されることから、IANファミリーとBcl-2ファミリーの間に機能相関があることが示唆された。(2)Tリンパ球分化におけるIANファミリー分子の役割種々のTCR Tgマウス由来の胸腺細胞を用いてTリンパ球の分化・選択に限局した解析を行い、IAN4が正の選択に必須の役割を果たすこと、およびIAN5がDN4細胞からDP細胞への分化に重要であることを見出した。さらに、shRNA発現レンチウイルスベクターによる遺伝子ノックダウンと骨髓キメラマウスの作製によって、造血系細胞の分化への影響を個体レベルで解析中である。(3)ノックアウト(KO)マウスの作製による個体レベルの解析IAN4-KOマウスの作製を行った。IAN4遺伝子座は繰り返し配列に富むためターゲティングベクターの作製や相同組み換え体ES細胞の選別が難航したが、既に複数のES細胞クローンを得ており、現在キメラマウスを作製中である。同時に、8種類のIANファミリー遺伝子全てを欠失させたKOマウスを作製するため、ターゲティングベクターの構築を進めている。(1)(2)の成果をPLoS Biology誌(2006,in press)に発表した。

機能未知のGTP結合タンパクであるIANファミリー分子群に着目し、Tリンパ球の分化と生存制御におけるそれらの役割について、解析を行った。(1)IANファミリー分子とBcl-2ファミリー分子間の相互作用GFP融合タンパク質と共焦点レーザー顕微鏡を用いた観察、および細胞抽出物の分画法により、IAN4とIAN5がミトコンドリアおよび小胞体に局在することを明らかにした。兔疫共沈降法を用いて、Tリンパ球におけるIAN4、IAN5とBcl-2ファミリー分子の相互作用を明らかにした。また、IAN5遺伝子のノックダウンによるTリンパ球細胞のアポトーシスの亢進が、Bcl-xLの過剰発現によって抑制されることから、IANファミリーとBcl-2ファミリーの間に機能相関があることが示唆された。(2)Tリンパ球分化におけるIANファミリー分子の役割種々のTCR Tgマウス由来の胸腺細胞を用いてTリンパ球の分化・選択に限局した解析を行い、IAN4が正の選択に必須の役割を果たすこと、およびIAN5がDN4細胞からDP細胞への分化に重要であることを見出した。さらに、shRNA発現レンチウイルスベクターによる遺伝子ノックダウンと骨髓キメラマウスの作製によって、造血系細胞の分化への影響を個体レベルで解析中である。(3)ノックアウト(KO)マウスの作製による個体レベルの解析IAN4-KOマウスの作製を行った。IAN4遺伝子座は繰り返し配列に富むためターゲティングベクターの作製や相同組み換え体ES細胞の選別が難航したが、既に複数のES細胞クローンを得ており、現在キメラマウスを作製中である。同時に、8種類のIANファミリー遺伝子全てを欠失させたKOマウスを作製するため、ターゲティングベクターの構築を進めている。(1)(2)の成果をPLoS Biology誌(2006,in press)に発表した。