Carmalにより制御されるシグナル伝達分子の探索及びシグナル伝達機構の解析

寻找Carmal控制的信号转导分子并分析信号转导机制

• 批准号: 17790333
• 负责人: 原 博満
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Saga University (2006)The Institute of Physical and Chemical Research (2005)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790333/
• 关键词: Carmal; NF-kB; TCR; T細胞; NF-κB; リピッドラフト; Carma1; 抗原レセプター

「研究の目的」Carmalの機能を明らかにするため、 Carmalと相互作用ずるシグナル伝達分子の探索と機能解析を目的として研究を行った。前年度の実績により、Carmalと特異的に相互作用する分子(以下、分子Xと称す)を、酵母ツーハイブリッド法を用いたスクリーニングにより同定した。本年度は、同分子が、Carmalが媒介するシグナル伝達経路に及ぼす影響と、さらにその生理的意義を明らかにすることを目的とし、研究を行った。「本年度の研究成果」1.分子XとCarmalの相互作用のシグナル伝達における役割を解明するため、 Carmalと分子Xの各種欠失/部分変異分子を用いた検討の結果、Carmalと分子Xが物理的に相互作用するために必要な部位を同定した。次に、分子Xとの相互作用に必須のアミノ酸部位に部分変異を導入したCarmalを、 Carmal欠失Jurkat株(JpM50.6)に導入した復帰株を作成し、 T細胞抗原レセプター(TCR)刺激後のNF-kB活性化に及ぼす影響を、NF-kB結合配列をプロモーターに有するLuciferase発現カセットを用いたレポーター解析により解析した。その結果、部分変異を導入したCarmalをトランスフェクトしたJPM50.6は、TCR刺激およびPMA+CD28刺激を介したNF-kB活性化を復帰することが出来なかった。従って、 Carmalと分子Xの相互作用が、TCRを介したNF-kB活性化をポジティブに制御していることが明らかとなった。2.分子XとCarmalの相互作用の生理的意義を解明するため、分子Xとの結合に必須のアミノ酸に点変異を導入したCarmalのノックインマウスの作成を開始した。現在までのところ、相同組み替えにより点変異を持つCarmal分子を片方のアリルに持つES細胞は既に樹立し、そのESクローンから樹立したキメラマウスの作成に成功している。

Purpose の "study" Carmal の function を Ming ら か に す る た め, Carmal と interaction ず る シ グ ナ ル 伝 molecular の explore と function analytical を end と し を line っ て research た. Before the annual の be performance に よ り, Carmal と specific に interaction す る molecules (hereinafter, molecular X と す) を, yeast ツ ー ハ イ ブ リ ッ を ド method using い た ス ク リ ー ニ ン グ に よ り be し た. は this year, with the molecular が, Carmal が medium す る シ グ ナ ル 伝 da に 経 road and ぼ す influence と, さ ら に そ の physiological significance を Ming ら か に す る こ と を purpose と し line, research を っ た. "This year's research achievements の" 1. Molecular X と Carmal の interaction の シ グ ナ ル 伝 da に お け cut を る service interpret す る た め, Carmal と molecular X の various owe lost/part - different molecular を い た beg の 検 results, Carmal と molecular interaction between X が physical に す る た め に を な parts with necessary し た. Time に, molecular X と の に interaction must の ア ミ ノ acid site に part - different を import し た Carmal を, loss Carmal owe Jurkat strains (JpM50.6) に import し た 帰 を into し strains, T cell antigen レ セ プ タ ー の NF - (TCR) stimulation kB activation に and ぼ す influence を, NF - kB combined with column を プ ロ モ ー タ ー に have す る Luciferase 発 now カ セ ッ ト を with い た レ ポ ー タ ー parsing に よ り parsing し た. そ の results, some variations different を import し た Carmal を ト ラ ン ス フ ェ ク ト し た JPM50.6 は, which stimulate お よ び PMA + CD28 stimulus を interface し た NF - kB activation を complex 帰 す る こ と が out な か っ た. 従 っ て, Carmal と molecular X の が interaction, which is the を interface し た NF - kB activation を ポ ジ テ ィ ブ に suppression し て い る こ と が Ming ら か と な っ た. 2. Molecular X と Carmal の の physiological を interpret the significance of interaction between す る た め, molecular X と の must combine に の ア ミ ノ acid に points - different を import し た Carmal の ノ ッ ク イ ン マ ウ ス の made を began し た. Now ま で の と こ ろ, the same group for え み に よ り points - different を hold つ Carmal molecular を piece side の ア リ ル に hold つ は ES cells both に し, そ の ES ク ロ ー ン か ら set し た キ メ ラ マ ウ ス の made に successful し て い る.

项目成果

抗原レセプターを介したNF-κB活性化経路

抗原受体介导的 NF-κB 激活途径

• 发表时间: 2005
• 期刊: 実験医学 23・13
• 作者: Kikuchi K;Yanagawa Y;Onoe K;原博満
• 通讯作者: 原博満