腎臓特異的薬物輸送蛋白OATP-Rのノックアウトマウスの作製と生体内機能の解明

肾脏特异性药物转运蛋白OATP-R敲除小鼠的产生及其体内功能的阐明

• 批准号: 17790347
• 负责人: 鈴木 健弘
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790347/
• 关键词: トランスレーショナルリサーチ; 遺伝子; 薬理学

研究の目的研究代表者が単離したOATP-Rは腎尿細管上皮細胞の血管側に発現する有機アニオントランスポーターであり、腎臓での薬剤や腎不全物質の排泄を担う分子である。本研究では、OATP-RノックアウトマウスをCre recombinnaseを用いたconditional gene targetingで作製し、機能喪失モデルでOATP-Rの生体内機能の解析を行い、さらに腎不全モデル、薬剤性腎障害モデルをノックアウトマウスで作製し、その病態における変化を検討することを目的とする。ノックアウトコンストラクトの作製マウスOATP-Rはマウス第一染色体上に13個のexonが約50kbに渡って分布している。この第4番目のexon(以下Ex4)をノックアウトするためのGene Targeting vectorの作製を行った。Gene Targeting vectorの構造はEx4を挟み、その5'側のintronにloxP配列を、3'側のintronにES細胞への導入時のpositive selectionのためのneomycin耐性遺伝子の両端にloxP配列を配置してある、loxP-neo-loxpカセットを挿入し、Cre recombihaseによるEx4のdeletionを行うようにし、また相同組換えのために5'側に約8.8kbのlonga arm、3'側に1.2kbのshort armとなるマウスOatp-Rのgenomic DNAを配置する設計とした。実際にノックアウトマウスを作製する系統である、129SVJ mice strainのgenomic libraryをEx4を含むDNAプローブを用いた方法でスクリーニングしEx4の5'側、3'側とも約10kbを含むgenomic DNAのクローンを単離し、さらに適切な制限酵素で切り出した断片をpBluescript-SK(+) plasmidへサブクローニングした。loxP配列の挿入上問題となる、intron上のcis elementを避けるため、同部位のintronの塩基配列をsequenceで確認の上(NIH等のマウスゲノムDNAのデータベースにあるC57BL/6 strainと比較すると、129SVJ strainではintron部分の塩基配列はsequenceを行った約3000bpの部位のみでも全体の1.4%程で塩基の置換や欠失等の相違があった)、loxP配列挿入部位を決定した。現役Gene Targetinng vectorが完成し、今後ES細胞への導入とノックアウトマウス系列の樹立の段階へと研究を進めていく予定である。

Objective of the study: OATP-R is a molecular marker for the production of organic substances in renal tubule epithelial cells on the vascular side. The purpose of this study is to control the conditional gene targeting of OATP-R using Cre recombinnase, analyze the in vivo function of OATP-R in terms of loss of function, and discuss the changes in the pathogenesis of renal insufficiency and pharmaceutical renal impairment. OATP-R has 13 exons on the first chromosome, which are about 50kb long. The Gene Targeting vector of the fourth item (Ex4 below) was developed. Gene Targeting Vector Structure Ex4: intron on 5'side loxP alignment Ex4: intron 3' side loxP alignment Ex4: deletion Ex 5'side loxP alignment Ex 4: deletion Ex4: deletion Ex4: Design of 1.2 kb short arm on 3'-side DNA alignment In fact, the system for the production of these enzymes is available in the following ways: 129SVJ rice strain genomic library Ex4 containing DNA fragments Ex 4 5 'side, 3' side and about 10kb containing genomic DNA fragments Ex4 5'side, 3' side and about 10kb containing genomic DNA fragments Ex4 5'side, 3' side and about 10kb containing genomic DNA fragments Ex 4 5 'side, Ex 4 5' side and Ex 4 5 'side. Lox P alignment is not easy to detect, the cis element on intron is not easy to detect, the base alignment sequence of intron at the same site is easy to confirm (NIH et al. must compare the DNA base alignment sequence of C57BL/6 strain, 129SVJ strain must compare the base alignment sequence of intron part to about 3000bp site, 1.4% of the total length of base substitution is not easy to detect), and the loxP alignment site is determined. The Gene Targeting Vector has been completed, and the research on the introduction of ES cell lines into ES cells in the future will be carried out in a predetermined manner.

项目成果

腎障害合併高血圧における降圧剤の使い方

肾功能损害高血压患者如何使用降压药

• 发表时间: 2005
• 期刊: クリニカ 32巻・3号
• 作者: Yoshioka T;Suganuma T;Tan AC;Matsushita S;Manno S;Kozu T;鈴木健弘;鈴木健弘
• 通讯作者: 鈴木健弘

Isolation and characterization of a digoxin transporter and its rat homologue expressed in the kidney

• DOI: 10.1073/pnas.0304987101
• 发表时间: 2004-03-09
• 期刊: PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
• 影响因子: 11.1
• 作者: Mikkaichi, T;Suzuki, T;Abe, T
• 通讯作者: Abe, T

ヒト腎臓特異的に発現しジゴキシン輸送を担う新規アニオントランスポーターの単離と機能解析及びラット相同遺伝子の同定

一种在人肾中特异性表达并负责地高辛转运的新型阴离子转运蛋白的分离和功能分析，以及大鼠同源基因的鉴定

• 发表时间: 2005
• 期刊: 東北医学雑誌 117巻・2号
• 作者: Yoshioka T;Suganuma T;Tan AC;Matsushita S;Manno S;Kozu T;鈴木健弘;鈴木健弘;鈴木健弘
• 通讯作者: 鈴木健弘