癌化に伴う生体内でのhTERT自己抗体の出現とその臨床応用

与癌症转化相关的体内hTERT自身抗体的出现及其临床应用

• 批准号: 17790443
• 负责人: 辻 宏和
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790443/
• 关键词: 抗hTERT自己抗体; テロメア; 肝硬変; 肝細胞癌; ELISA; 腫瘍マーカー

抗hTERT自己抗体を定量化し、多標本間の比較・経時的変化の測定を可能にするために、抗hTERT抗体ELISA測定系の確立・標準化を試みた。まず,付着昆虫細胞系で発現し部分精製したFLAG-hTERT蛋白あるいは浮遊細胞系で発現・精製を行ったNFLAG-hTERT蛋白を各試料プレートに約100ng通常法で固定し、血清アルブミンにより未固定部分を埋める方法を用いてELISAプレート試作品を作成した。このELISAプレートを用い、慢性肝疾患・肝硬変・肝がん患者の血清と、胃癌・大腸癌・膵胆道系癌・肺癌・乳癌などCEA高値を示す他の担がん患者の少数例の血清を用い、OD値を測定した.肝硬変・肝がん患者では健常者と比べ有意に抗hTERT自己抗体価が高値となる予備的結果を得た。また胃癌・大腸癌・膵胆道系癌・肺癌・乳癌などCEA高値を示す担がん患者でも同様に健常者と比べ有意に抗hTERT自己抗体価が高値を呈する予備的結果を得た.ELISA測定系の条件設定後、多プレート間での検体の比較および同一患者での経時的な変化を検討するために標準化をはかった。予備実験にてOD高値を示した患者血清を標準物質とし、この検体中のhTERT抗体の濃度を100KIU/mLとして2倍希釈系列を作製したところ、高い相関を示す標準曲線が得られ、OD値とhTERT Ab値の相関はhTERT Ab濃度を対数とした片logグラフにてほぼ直線の関係が得られた。

Quantification of anti-hTERT antibodies, comparison between multiple antibodies, and determination of time-consuming changes are possible. Establishment and standardization of anti-hTERT antibody ELISA assay systems In this study, we developed a partially purified FLAG-hTERT protein from insect cell lines, and developed a purified NFLAG-hTERT protein from plankton cell lines. Each sample was prepared by ELISA using approximately 100ng of the normal immobilized and serum unimmobilized fractions. This ELISA is used to determine serum levels and OD levels in a few patients with chronic liver disease, cirrhosis, liver cancer, gastric cancer, colorectal cancer, biliary tract cancer, lung cancer, breast cancer, CEA elevation, and others. Patients with cirrhosis and liver disease who are healthy are more likely to have high levels of anti-hTERT antibodies than those who are prepared. For gastric cancer, colorectal cancer, biliary tract cancer, lung cancer, breast cancer, CEA high values, the results of the preparation were obtained. After the conditions of the ELISA system were set, the comparison between multiple samples and the standardization of the time of the same patient were discussed. The relationship between OD and hTERT Ab concentration in serum was obtained by comparing OD with hTERT Ab concentration in serum.