MAPKホスファターゼによるタイト結合蛋白発現制御と炎症性腸疾患に対する効果

MAPK磷酸酶对紧密连接蛋白表达的调节及其对炎症性肠病的影响

• 批准号: 17790459
• 负责人: 大島 忠之
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Hyogo Medical University (2006)Nagoya City University (2005)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790459/
• 关键词: 炎症性腸疾患; MAPKホスファターゼ; タイト結合; クローディング; 内科; シグナル伝達; 遺伝子; 生体分子

本研究では,MAPキナーゼを制御するMAPキナーゼフォスファターゼによるタイトジャンクション蛋白発現制御をin vitroで検討し,in vivoでは腸炎抑制効果を検討することを目的とした.1.組換えアデノウイルスを用いたin vitroでの検討MKP(1,3,7)とWip-1のそれぞれを発現する組換えアデノウイルスを大腸上皮細胞に前投与し,過酸化水素刺激(500μM)下での,クローディン(1,2,3,4,7)の発現変化をWestern blotting, real time PCR,免疫蛍光染色を用いて検討した.Wip-1蛋白の発現確認は,抗Flag抗体を用いてWestern blottingで確認した.またこれら感染細胞で過酸化水素刺激による大腸上皮粘膜透過性の上昇(電気抵抗値の低下,FITC dextranの透過性上昇)は抑制された.Wip-1発現により過酸化水素刺激によるクローディン-4の局在変化は抑制された.MKP発現アデノウイルスでは明らかな変化はみられなかった.Wip1が過酸化水素刺激による大腸粘膜透過性上昇を抑制することが明らかとなった.またこの機序にタイトジャンクション蛋白:クローディン-4が重要であることが明らかとなった.2.MKP発現組換えアデノウイルスを用いた腸炎抑制効果の検討これらアデノウイルスの効果をin vivoで検討するため4%DSSをC57BL/6J-664マウスに7日間自由引水させることによりDSS腸炎マウスモデルを作成した.In vivoでの検討を行うため,Wip1発現アデノウイルスを調整した.作成したアデノウイルスの効果を検討するために,種々の濃度で経肛門的に投与し,便性状,貧血,体重,大腸長,大腸重量,大腸組織内myeroperoxidase(MPO)活性あるいは病理組織学的変化の検証を試みた.これまでのところWip-1発現アデノウイルスによる腸炎抑制効果は明らかでない.今後は投与方法の工夫が必要であると考えている.

In this study, we investigated MAP protein expression in vitro, in vivo and in vivo in the study of enteritis inhibitory effect. 1. The study of MKP(1, 3, 7) and Wip-1 protein expression in vitro, in vivo and in vivo in the study of intestinal epithelial cells. Western blotting, real time PCR, immunoluminescence staining were used to detect the expression of Wip-1 protein. Western blotting was used to detect the expression of anti-Flag antibody. The permeability of colon epithelial mucosa increased when infected cells were stimulated by hyperacidified water.(Low electrical resistance, increased permeability of FITC dextran).Wip-1 occurrence.Wip-1 occurrence. Wip1 occurrence. Wip1 occurrence. 2. MKP discovery group change: lose it; lose it The results of this study were analyzed, including the concentration of species, anal administration, stool traits, anemia, body weight, large intestine length, large intestine weight, myeroperoxidase(MPO) activity in large intestine tissues, and pathological changes. The Wip-1 was found to have lost its ability to suppress enteritis. In the future, it is necessary to invest and work hard.