NRSF系を利用した骨髄細胞のペースメーカ細胞への分化誘導法の開発

开发利用 NRSF 系统诱导骨髓细胞分化为起搏细胞的方法

• 批准号: 17790495
• 负责人: 竹田 征治
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Nara Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790495/
• 关键词: ペースメーカ細胞; 分化誘導法; NRSF; 骨髄間葉系幹細胞; 骨髄間質細胞

洞機能不全症候群や房室ブロックは心筋の刺激伝導系細胞の変性疾患であり、今までペースメーカ治療を必要としてきた。主研究者らは、NRSF/VP16をプラスミドを遺伝子導入することでNRSFを抑制させ、ペースメーカ特異的分子(HAC1、HAC2、CaCNA1Hなど)を発現させたヒト骨髄間質細胞に脱メチル化剤を投与しさらにマウス心筋と共培養することで心筋をペースメーカ細胞に特異的に分化させることを試みた。まず、主研究者の研究室で分離培養したヒト骨髄間質細胞を培養し、増殖能力のよい幹細胞の能力を有する細胞を限外希釈法でクローニングした。クローニングした細胞の性質をFACSにて細胞表面マーカーを測定することで、細胞の性質を検討した。細胞はCD29陽性、CD90陽性、CD117陽性の骨髄問葉系幹細胞のマーカーを発現していた。その細胞にNRSFに直接強力な転写エンハンサーであるヘルペスウィルスVP16を融合させたキメラ遺伝子NRSF/VP16を導入したプラスミドをリポフェクション法を用いて効率よくトランスフェクションすることに成功した。さらにその細胞に対して、従来、われわれが心筋への分化誘導をするために用いてきた方法(J Gene Med. 2004 Aug ;6(8):833-45)として、遺伝子導入ヒト骨髄間質細胞に脱メチル化剤を投与し、さらにマウス心筋細胞との共培養法を用いることにより、ペースメーカ細胞への分化を試みた。現在、心筋細胞様の拍動する心筋細胞の獲得に成功したので、ペースメーカ細胞に特異的な遺伝子を用いて、ペースメーカ細胞としての機能を有しているかどうかにつき検討中である。また、NRSFノックアウトマウスを作成した。NRSFノックアウトマウスの骨髄細胞を抽出し、上記の心筋分化誘導法を用いてペースメーカ細胞への分化誘導に最適な条件を検討している。

Cave Insufficiency Syndrome is a disease that stimulates the cells of the ventricular and ventricular myocardium, and is a disease that stimulates the conductive cells, and it is necessary to treat it now. The main researcher, らは, NRSF/VP16 をプラスミドを缝子, introduced することでNRSFを to inhibit させ, ペースメーカ-specific molecules (HAC1, HAC2, CaCNA1Hなど)を発 appear させたヒトBone bone mesenchymal cells に出メチル化剤をinvestment しさらにマウス心丝とCo-culturing of することで心丝をペースメーカ cells にspecific にdifferentiation させることをtestみた. The principal investigator's laboratory is capable of isolating and culturing bone marrow mesenchymal cells, and is capable of proliferating stem cells.クローニングしたThe properties of cells are measured by FACS and the surface of cells is tested. The cells are CD29-positive, CD90-positive, and CD117-positive stem cells of the bone and leaf stem cells.そのcellにNRSFにDirect powerful な転WRITE エンハンサーであるヘルペスウィルスVP16をfusion させたキメラ伝子NRS F/VP16をImport したプラスミドをリポフェクション法をUse your efficiency to achieve success. Differentiation induction of さらにそのcellsに対して、従来、われわれが心丝へのをするために using the いてきた method (J Gene Med. 2004 Aug ; 6 (8): 833-45) Injection into the bone marrow interstitial cells, and injecting into the bone marrow stromal cells. The co-culture method of myocardial myocardial cells and myocardial cells was tested using the differentiation of myocardial cells and myocardial cells. Now, the cardiac cells are beating, the cardiac cells are successful, and the cardiac cells are special. The function of the remaining cells and the functions of the remaining cells are as follows.また、NRSFノックアウトマウスを成した. NRSF ノックアウトマウスのbone marrow cell extraction and induction of cardiac differentiation The method is to use the optimal conditions to induce differentiation of human cells and use them.