高血糖によるメチルグリオキサール付加修飾蛋白の糖尿病血管合併症における意義

高血糖诱导的甲基乙二醛修饰蛋白在糖尿病血管并发症中的意义

• 批准号: 17790609
• 负责人: 田口 哲也
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790609/
• 关键词: 糖尿病; 転写因子; メチルグリオキサール

研究者らは以前に網膜ミューラー細胞の高グルコース培養条件下で,解糖系の中間代謝物から生成するα-ジカルボニル化合物メチルグリオキサール(MG)が,核蛋白Sp3のcofactorであるmSin3Aに付加修飾することにより機能変化をもたらし,angiogenic factorであるangiopoietin-2の遺伝子発現の制御を報告,高血糖環境における遺伝子発現変化の一因となりうる可能性を示した.本研究では,対象をより拡大し,血管内皮細胞を用いてMG付加修飾を受ける転写因子,cofactorを検索し,これらにより発現調節を受ける遺伝子群を同定して,糖尿病血管合併症における役割を明らかにするものである.抗MG抗体の作製については,MGとウサギ血清アルブミンを無菌条件下において一定期間反応させて調整した後,生成したMG由来最終糖化産物(AGE)であるhydroimidazolone(MG-H1)を家兎免疫して抗血清を作成し,アフィニティーカラムを用いて調整の予定で,現在作製途中である.またウシ大動脈血管内皮細胞株を用いて,MGを変換する酵素g1yoxalase-1(glo-1),あるいは対照(empty)のアデノウイルス(Ad)を感染させた細胞を(1)5mMグルコース(LG)+Ad-empty,(2)30mMグルコース(HG)+Ad-empty,(3)HG+Ad-glo-1の条件で5日間培養し,各々から核蛋白を採取した.続いて先に他施設から供与頂いた抗MG-H1抗体結合イムノアフィニティーカラムに核蛋白試料を注入,カラムから溶出させた蛋白をSDS-PAGEにより分離し,銀染色を施行,目的とするMG付加修飾核蛋白(HG+Ad-emptyで増加し,HG+Ad-glo-1で減弱するバンド)の候補を約30kDa相当の位置に認めた.今後再現性について確認した後,続いてプロテオミクス解析を行う予定である.

In the past, under the condition of high-level cell culture, the researchers tested the production of alpha-cytopathic acid compounds in the carbohydrate system, the nuclear protein Sp3-cofactor-mSin3A, the mSin3A-plus-repair, and the angiogenic factor-based angiopoietin-2 repertoire. The possibility of the realization of hyperglycemia in the environment of hyperglycemia is shown to be significant. In this study, vascular endothelial cells were treated with MG, cofactor, cofactor, subgroups, diabetic angiopathy and diabetic angiopathy. Anti-MG antibodies were used as antisera for antiserum antigens. Under sterile conditions, the antisera of MG antisera were tested for a certain period of time. After a certain period of time, the antisera of antisera (AGE), antisera (MG-H1), antisera of antisera, antisera, antisera The cell lines of vascular endothelial cells were infected with MG enzyme g1yoxalase-1 (glo-1), empty and Ad (1) 5mM LG + Ad-empty, (2) 30mM + Ad-empty, (3) HG+Ad-glo-1 conditions were incubated for 5 days, and the nucleoproteins were isolated. In the first place, we used other equipment to combine the anti-MG-H1 antibody with anti-HG+Ad-glo-1 antibody. After injection of the nucleoprotein, the soluble protein was separated by SDS-PAGE, and the staining was carried out. The purpose of this study is to determine the location of the MG plus modified nucleoprotein (HG+Ad-empty plus, HG+Ad-glo-1 weak nucleoprotein). In the future, after the sexual confirmation, please tell me that the line is scheduled to be confirmed.

项目成果

Methylglyoxal Modification of mSin3A Links Glycolysis to Angiopoietin-2 Transcription

• DOI: 10.1016/j.cell.2007.01.026
• 发表时间: 2007-02
• 期刊: Cell
• 影响因子: 64.5
• 作者: Dachun Yao;T. Taguchi;T. Matsumura;R. Pestell;D. Edelstein;I. Giardino;G. Suske;N. Ahmed;Paul J Thornalley;V. Sarthy;H. Hammes;M. Brownlee

Impact of mitochondrial reactive oxygen species (ROS) and apoptosis signal-regulating kinase 1 (ASK1) on insulin signaling

线粒体活性氧 (ROS) 和凋亡信号调节激酶 1 (ASK1) 对胰岛素信号传导的影响

• 发表时间: 2006
• 期刊: Diabetes (in press)
• 作者: Hirayama S;Miida T;Obayashi K;et al.;Ebihara K 他;海老原健;海老原健 他;海老原健 他;海老原健;海老原健 他;海老原健 他;海老原健 他;海老原健 他;海老原健 他;海老原健 他;Yao D et al.;Imoto K et al.
• 通讯作者: Imoto K et al.