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TRAF6変異体導入による白血病細胞の増殖制御解析と新たな治療法への応用

引入TRAF6突变体对白血病细胞增殖控制的分析及其在新治疗方法中的应用

基本信息

批准号：
17790660
负责人：
吉田安宏
金额：
$ 2.24万
依托单位：
University of Occupational and Environmental Health, Japan
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790660/
关键词：
TRAF6 ミリストイレーション NF-κB STAT3 白血病シグナル伝達

项目摘要

本年度は特に白血病細胞株を用いて、STA73/NF-κB複合体の影響を解析する事を目的として研究を行った。細胞株としてJurkat、 HU778 (T細胞白血病株)、HUT102、M1、M2、M4 (HTLV-1陽性T細胞白血病株)などを用いた。これらの細胞における転写因子の活性化をゲルシフト法により解析したところ、恒常的なSTA73及びNF-κBの活性化が観察された。しかしながらその活性化の程度には細胞により違いがあった。HUT102細胞ではSTA73/NF-κB複合体が無刺激の状態で弱いながらも形成されていることがウエスタンブロッティングにより観察された。STA73/NF-κB複合体を誘導することができるプラスミドpFM289(これはTRAF6の288番目までのN末端配列を欠損した変異体で、更にそのN末端側にSrcファミリー分子が持つ特徴的な配列'ミリストイレーション'を遺伝子的に導入したものである)をトランスフェクションし過剰発現させたところ、より多くのSTA73/NF-κB複合体が誘導された。血管新生に関与する事が知られているVEGF遺伝子はIL-6及びSTA73により活性化されることが知られている。そのリポータープラスミドを用いてルシフェラーゼアッサイを行ったところ、pFM289プラスミドは顕著にその活性を阻害することが確認された。更には、 pFM289はミリストイレーション付加をしていない変異体に比べ、より効果的な阻害様式を呈していた。またpFM289はcanonicalなNF-κBの活性化も抑制した。以上より、腫瘍性増殖に重要と考えられるSTA73とNF-κBの経路に対し、pFM289は効率よく抑制できる事が示唆された。今後は白血病細胞の増殖をin vivoシステムで解析し、より詳細なメカニズムの探求・治療への応用を検討したいと考えている。

This year, we conducted research on the use of special leukemia cell lines and analysis of the impact of the STA73/NF-κB complex. The cell lines are Jurkat, HU778 (T-cell leukemia strain), HUT102, M1, M2, M4 (HTLV-1 positive T-cell leukemia strain) and Jurkat.これらのCell における転ACTIVATION をゲルシフト法によりANALYSISしたところ, constant なSTA73 and NF-κB activation が観看された. The degree of activation of the cells is determined by the degree of activation of the cells. The STA73/NF-κB complex in HUT102 cells is in a non-stimulating state and is weak.ながらも成されていることがウエスタンブロッティングにより観看された. STA73/NF-κB complex induced pFM289(これはTRA F6's 288th chapter, the N-terminal arrangement, the defective variant, the N-terminal side, the modified Src, the modified versionがholdつ特徴的な配array'ミリストイレーション'を伝子的に Import したものである)をトランスフェクションし过剰発appears させたところ, より多くのSTA73/NF-κB complex がinducing された. Angiogenesis is closely related to the activation of VEGF, IL-6 and STA73.そのリポータープラスミドを用いてルシフェラーゼアッサイを行ったところ, pFM289 プラスミドは顕敕れた。 The new version of pFM289 is a modified version of the original version of the original version. pFM289 is a canonical inhibitor of NF-κB activation. As mentioned above, the importance of tumor growth and growth, STA73 and NF-κB pathways, and pFM289's efficiency and inhibition, are all important. From now on, we will analyze the proliferation of leukemia cells in vivo and explore and treat them in detail.