血液凝固因子プロトロンビンSNPsの分子モデル構築による病態機能検索

通过构建凝血因子凝血酶原SNPs分子模型进行病理功能研究

• 批准号: 17790663
• 负责人: 桑原 光弘
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790663/
• 关键词: 血栓; SNP; 凝固; RNA; 遺伝子; 発現; プロセッシング; イントロン

リアルタイムPCR、蛍光ジェネティックアナライザー等最新の分子生物学の技術を駆使し、申請者独自のmRNAレベル、poly(A)tailingの位置等を定量する新システムを構築した。プロトロンビン遺伝子の転写終結シグナルは非典型的配列構造をとっているので、従来の概念で構築したミニ遺伝子の転写終結シグナルだけでは、十分に遺伝子転写を終結することが出来なかった。しかし、十分の数のイントロンミニ遺伝子に組込むことにより、効率的な遺伝子転写終結が可能になった。また多イントロンをミニ遺伝子に組込むことにより、効率的イントロンスプライシングが可能になった。この多イントロンを含むミニ遺伝子をもとにSite Directed Mutagenesisの手法を用い、血栓症のリスクファクターであるSNP G20210A (poly(A)tail付着位置における一塩基多型)を有するプロトロンビンミニ遺伝子を構築した。G20210Aにおける血漿中プロトロンビン濃度の上昇メカニズムは諸説に分かれていたが、これは良い分子モデルが今まで存在しなかったのが一因と思われる。正常(20210G)およびSNP(20210A)を有するプロトロンビンミニ遺伝子をTLR-2細胞に導入し、培養液中に分泌されるプロトロンビンを正常のものと比較検討したところ、20210Aは20210Gに比べ約1.5倍の蛋白産生増加がみられた。TLR-2細胞はSV40T抗原を導入したトランスジェニックマウスより得られた肝細胞の培養系であり、培養環境にあっても肝臓の機能が良く反映されている。さらに詳細に調べていった結果、20210Aは20210Gに比べ約1.5〜2倍のmRNA産生増加がみられ、これはDNAからRNAへの転写終結が効率良く行われたことによることが分かった。

リ ア ル タ イ ム PCR, 蛍 light ジ ェ ネ テ ィ ッ ク ア ナ ラ イ ザ ー の の latest molecular biology techniques such as を 駆 alone make し, applicants の mRNA レ ベ ル, poly real (A) tailing の position such as quantitative す を る new シ ス テ ム を build し た. プ ロ ト ロ ン ビ ン posthumous son 伝 の planning to write an end シ グ ナ ル は atypical match column structure を と っ て い る の で の concept, 従 で build し た ミ ニ posthumous son 伝 の planning to write an end シ グ ナ ル だ け で は, very に heritage 伝 son planning write を end す る こ と が out な か っ た. し か し, very の の イ ン ト ロ ン ミ ニ posthumous son 伝 に group 込 む こ と に よ な of り, sharper rate 伝 child may planning to write an end が に な っ た. ま た more イ ン ト ロ ン を ミ ニ heritage 伝 son に group 込 む こ と に よ り, sharper rate イ ン ト ロ ン ス プ ラ イ シ ン グ が may に な っ た. こ の more イ ン ト ロ ン を containing む ミ ニ heritage 伝 son を も と に Site Directed Mutagenesis の gimmick を い, thrombosis の リ ス ク フ ァ ク タ ー で あ る SNP G20210A (poly(A)tail with position における -shiodoform)を has するプロトロ ビ ビ <e:1> ニ ニ 伝 derivative を to construct た. G20210A に お け る プ in plasma ロ ト ロ ン ビ ン concentration rising の メ カ ニ ズ ム は "か に points れ て い た が, こ れ は good い molecular モ デ ル が today ま で exist し な か っ た の が one for と faint わ れ る. Normal (20210 g) お よ び SNPS (20210 a) を す る プ ロ ト ロ ン ビ ン ミ ニ posthumous son 伝 を TLR - 2 cells に import し, medium, に secretion さ れ る プ ロ ト ロ ン ビ ン を normal の も の と compare beg し 検 た と こ ろ, 20210 a, 20210 g は に is 1.5 times than べ の proteins from rights and が み ら れ た . TLR - 2 cells は SV40T antigen を import し た ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス よ り have ら れ の た hepatocytes is で あ り, cultivating environment に あ っ て も perforatien の liver function good が く reflect さ れ て い る. さ ら に detailed に adjustable べ て い っ た results, 20210 g 20210 a は に is about 1.5 ~ 2 times than べ の mRNA have raised plus が み ら れ, こ れ は DNA か ら RNA へ の planning to write an end が sharper rate good line く わ れ た こ と に よ る こ と が points か っ た.

项目成果

プロトロンビンSNP : G20210Aに置ける血栓傾向の分子機構

凝血酶原SNP：G20210A血栓形成倾向的分子机制

• 发表时间: 2005
• 期刊: 日本血栓止血学会誌 16巻5号
• 作者: Nonomura Y;Nagasaka K;Hagiyama H;Sekine C;Nanki T;Tamamori-Adachi M;Miyasaka N;Kohsaka N.;野々村 美紀;金澤 智;杉原 毅彦;野々村 美紀;関根 知世子;杉原 毅彦;桑原光弘他
• 通讯作者: 桑原光弘他