Aβ投与及び外傷性軸索損傷モデルにおける骨髄幹細胞移植:電気生理学的解析

创伤性轴突损伤模型中 Aβ 给药和骨髓干细胞移植：电生理分析

• 批准号: 17790966
• 负责人: 相原 英夫
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790966/
• 关键词: βアミロイド; ラット海馬切片; axonal stretch injury

whole-cell patch-clumpにてNMDA, AMPA, GABA, Achなどの神経伝達物質の電流解析を行うため、マウス海馬の錐体神経細胞の単離培養およびラット海馬切片の組織培養を行った。培養条件のうち、培養温度については従来より指摘されているように、34度の低温の方が特に組織培養系で生存率が良い事が確認できた。血清濃度と至適培養温度について比較検討し、血清濃度は通常より高い20%が実験に適している事が判明した。培養後一週間でβアミロイド投与の有無による神経細胞死の評価を行い、神経細胞死が誘導されることが示唆された。同様の実験系を海馬スライス培養系を用いて確立する。また、axonal stretch injury modelをラット皮質からの神経培養を用いて行ったが、現時点で有意な結果を得るところまで解析は進んでいない。今後の追加実験が必要である。βアミロイドに関連して、体循環からの骨髄由来細胞の脳損傷部位への動員をGFP遺伝子導入マウスの骨髄細胞を5FU処置マウスの末梢血に注入しキメラマウスを作成、collagenaseを線条体に定位的に注入し脳内出血を作製し解析した。出血後day28まで脳切片中の骨髄由来細胞の出現と消退について観察した。出血後1-3日では血腫内に末梢血中のGFP(+)の白血球が観察された。免疫染色にて、血腫周辺にて一過性にvWF(+)の管腔形成に骨髄由来細胞は関与した。また、Iba-1(+)細胞の出現をday8から認めこれはday28まで続いた。一方、GEAP、Neu-Nに対しては骨髄由来細胞は陰性であった。骨髄由来細胞が神経系細胞へ分化する可能性については議論が多いが、今回の実験系では組織学的レベルで神経系細胞への分化は確認できなかった。

为了分析来自小鼠海马的锥体神经元的神经递质的电流，例如NMDA，AMPA，GABA和ACH，并在大鼠海马切片上培养组织。正如先前指出的那样，在培养条件下，有证实，在组织培养系统中，低温为34度的生存率更好。比较了血清浓度和最佳培养温度，发现血清浓度高的20％适合实验。培养后一周，在有或没有β-淀粉样蛋白给药的情况下评估神经元细胞死亡，这表明诱导了神经元细胞死亡。使用海马切片培养系统建立了类似的实验系统。此外，使用大鼠皮质的神经培养物进行轴突拉伸损伤模型，但分析尚未发展到此时获得显着结果的点。将来需要进行其他实验。与β淀粉样蛋白有关，通过将来自GFP转移的小鼠的骨髓细胞注射到5FU治疗的小鼠的外周血中，募集从全身循环到脑损伤部位的骨髓衍生细胞募集，从而产生嵌合体，从而产生嵌合式的嵌合体，并构成了胶原症的刻板性。观察到脑部切片中骨髓衍生细胞的外观和消失，直到流血后第28天。出血后1-3天，在血肿内观察到了外周血中GFP（+）的白细胞。通过免疫染色，骨髓衍生的细胞参与了血肿周围VWF（+）的瞬时腔。此外，从第8天开始观察到IBA-1（+）细胞的出现，直到第28天。另一方面，骨髓衍生的细胞对GEAP和NEU-N呈阴性。关于骨髓衍生细胞会分化为神经系统细胞的可能性存在很多争论，但是在这种实验系统中，无法在组织学水平上确认为神经系统细胞的分化。