klotho遺伝子のステロイドに対する制御機構への関与

klotho基因参与类固醇的调节机制

• 批准号: 17791025
• 负责人: 辻川 洋
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791025/
• 关键词: klotho; Na-K ATPase; ouabain; klotho遺伝子; ステロイド

(1)klotho遺伝子ノックアウトマウス野生型マウスとでNa-K ATPase活性に差異があるのか。klotho遺伝子発現細胞は腎臓皮質に限局し、一方、Na-K ATPase遺伝子発現細胞は、腎臓髄質および皮質でも見られるが、in situ hybridization法により、腎臓皮質においてのみ、両遺伝子発現細胞の一致が見られることを考えれば、腎皮質におけるNa-K ATPase機能こそがklotho遺伝子の影響下にあると考えられたので、両マウス腎臓から皮質のみを単離し、vanadate-facilitated[^3H]ouabain binding site content analysisにより、Na-K ATPaseの密度(含有量)が異なるかを検討したところ、ノックアウトマウスの腎臓で優位に上昇しており、さらに、^<86>Rb摂取率によるNa-K ATPase活性についても同様で、ノックアウトマウスでは、野生型マウスと比較して、Na-K ATPase活性も優位の上昇を認めた。ただし、マウス腎臓での髄質と皮質の分離にかなりの時間を要し、これからはpreliminary dataである。論文投稿には再現性が必要であることは強調しておく。(2)klotho遺伝子ノックアウトマウスと野生型マウスとでNa-K ATPaseを介するステロイドシグナルカスケードに違いがみられるか。前年度報告したように、野生型マウス腎臓を用いたnorthern-blot法により、ouabain投与により、klotho遺伝子の有意の発現上昇が認められた。Na-K ATPaseがステロイドのsignal transducerとして機能する際、内因性のcardiac glycosideであるouabainからの入力シグナルが最たるものであり、膜型KLOTHO蛋白はNa-K ATPaseと結合することでこのシグナルを制御していると考えられる。従って、klotho遺伝子ノックアウトマウスと野生型マウスとでは、ouabainに対する反応が異なり、これが表現型に寄与していることが予想され、ouabain投与後の両マウスから腎臓を摘出、さらに皮質を単離、これらよりmRNAを調整し、subtraction PCR hybridization法により、両者間で発現差異の著しい遺伝子群を見出す予定であったが、前述したように腎髄質と皮質の分離に時間を要し、結果は得られていない。

(1)klotho gene Klotho gene expression cells are restricted to the renal cortex, and Na-K ATPase gene expression cells are restricted to the renal cortex, and in situ hybridization, the renal cortex is restricted to the renal cortex, and the Klotho gene expression cells are restricted to the renal cortex. Vanadate-facilitated[^3H]ouabain binding site content analysis revealed that Na-K ATPase density (content) varied significantly, Na-K <86>ATPase activity increased significantly, Rb uptake increased significantly, Na-K ATPase activity decreased significantly, and Na-K ATPase activity increased significantly compared to wild type. The time of separation of cortex and kidney is important. Paper submission is necessary for reproducibility. (2)Klotho gene is a kind of gene that can be used to control the growth of Na-K ATPase. Previous Annual Report: The intentional occurrence of klotho, ouabain and klotho genes was identified by northern-blot analysis. Na-K ATPase is a signal transducer that binds to a membrane type KLOTHO protein, and its intrinsic cardiac glycoside is a signal transducer that binds to a membrane type KLOTHO protein. The gene expression of klotho gene is different from that of wild type gene expression. The gene expression of klotho gene expression is different from that of wild type gene expression. The above mentioned separation time of kidney and cortex is very important, and the result is very important.