唾液腺腫瘍構成細胞の分化におけるアクアポリンの関与について

关于水通道蛋白参与唾液腺肿瘤组成细胞的分化

基本信息

批准号：
17791312
负责人：
嶋香織
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Tokyo Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791312/
关键词：
唾液腺腫瘍多形性腺腫 Aquaporin 分泌顆粒 tight junction

项目摘要

唾液腺腫瘍は経過とともに細胞の分化や脱分化が見られ、多様で複雑な組織像を呈することから、分類が複雑で最終診断に苦慮することが多い。唾液腺発生過程で、水輸送機能を持つAquaporin (AQP)が発現することより、唾液腺腫瘍細胞の分化にAQPが関与するという仮説を立てた。今年度は、広島大学・高田隆教授より供与された多形性腺腫由来不死化細胞PA-hTERTを用いた。多形性腺腫は筋上皮細胞由来と考えられているため、まずPA-hTERT細胞でcytokeratinおよびvimentinの共発現を免疫蛍光染色で明らかとした。次に、PA-hTERT細胞の分化方向の検索を目的として、細胞極性を解析した。具体的には、上皮細胞で管腔側に発現するtight junction構成タンパクであるZO-1, claudin-1, claudin-2, occludinおよびamylaseの分泌について、免疫蛍光染色、透過型電子顕微鏡観察、Western blottingで検索した。その結果、ZO-1, claudin-1は、免疫蛍光染色で細胞突起間に強く発現していた。Western blottingではamylaseの発現が見られたが、超微構造観察では細胞質内には中間系filamentとmitochondriaが豊富であり、分泌顆粒様構造物はわずかに認められるのみであった。また、Ca^<2+>を用いて、tight junction proteinの発現を誘導したところ、amylaseの発現には変化がなかった。AQPの発現については、channel proteinとしての機能が明らかにされているAQP5,6の発現を免疫蛍光染色で検索した結果、AQP6が細胞膜および細胞質に局在していた。現在は、AQP6抗体を用いたtarnsientの阻害実験による分泌能の変化を検討中である。

随着时间的流逝，唾液腺肿瘤表现出细胞分化和去分化，并表现出多样化且复杂的组织学图像，使其在最终诊断中对它们进行分类和难以诊断。我们假设AQP参与了唾液腺肿瘤细胞的分化，因为它在唾液腺发育过程中表达了流动水通道蛋白（AQP）。今年，我们使用了由广岛大学的高田高地教授提供的源自腺瘤的永生细胞Pa-Htert。由于多态性腺瘤被认为是源自肌上皮细胞的，因此首先通过PA-HETTRT细胞中的免疫荧光染色揭示了细胞角蛋白和波形蛋白的共表达。接下来，分析细胞极性，目的是搜索Pa-htert细胞分化的方向。具体而言，使用免疫荧光染色，透射电子显微镜和蛋白质印迹搜索了ZO-1，claudin-1，claudin-2，occludin和淀粉酶的分泌，它们是在腔侧上皮细胞中表达的紧密连接组成蛋白。结果，通过免疫荧光染色在细胞突起之间强烈表达ZO-1和Claudin-1。在蛋白质印迹中观察到淀粉酶的表达，但是超微结构观察结果表明，中间丝和线粒体在细胞质中很丰富，只有少量的分泌颗粒样结构。此外，当使用Ca^<2+>诱导紧密连接蛋白的表达时，淀粉酶的表达没有变化。关于AQP的表达，我们搜索了AQP5和6的表达，这些表达已被揭示为使用免疫荧光染色，并发现AQP6定位于细胞膜和细胞质。目前，我们正在通过使用AQP6抗体抑制TARSINES来研究分泌能力的变化。