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唾液腺腫瘍構成細胞の分化におけるアクアポリンの関与について

关于水通道蛋白参与唾液腺肿瘤组成细胞的分化

基本信息

批准号：
17791312
负责人：
嶋香織
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Tokyo Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791312/
关键词：
唾液腺腫瘍多形性腺腫 Aquaporin 分泌顆粒 tight junction

项目摘要

唾液腺腫瘍は経過とともに細胞の分化や脱分化が見られ、多様で複雑な組織像を呈することから、分類が複雑で最終診断に苦慮することが多い。唾液腺発生過程で、水輸送機能を持つAquaporin (AQP)が発現することより、唾液腺腫瘍細胞の分化にAQPが関与するという仮説を立てた。今年度は、広島大学・高田隆教授より供与された多形性腺腫由来不死化細胞PA-hTERTを用いた。多形性腺腫は筋上皮細胞由来と考えられているため、まずPA-hTERT細胞でcytokeratinおよびvimentinの共発現を免疫蛍光染色で明らかとした。次に、PA-hTERT細胞の分化方向の検索を目的として、細胞極性を解析した。具体的には、上皮細胞で管腔側に発現するtight junction構成タンパクであるZO-1, claudin-1, claudin-2, occludinおよびamylaseの分泌について、免疫蛍光染色、透過型電子顕微鏡観察、Western blottingで検索した。その結果、ZO-1, claudin-1は、免疫蛍光染色で細胞突起間に強く発現していた。Western blottingではamylaseの発現が見られたが、超微構造観察では細胞質内には中間系filamentとmitochondriaが豊富であり、分泌顆粒様構造物はわずかに認められるのみであった。また、Ca^<2+>を用いて、tight junction proteinの発現を誘導したところ、amylaseの発現には変化がなかった。AQPの発現については、channel proteinとしての機能が明らかにされているAQP5,6の発現を免疫蛍光染色で検索した結果、AQP6が細胞膜および細胞質に局在していた。現在は、AQP6抗体を用いたtarnsientの阻害実験による分泌能の変化を検討中である。

Salivary gland tumors can be classified into multiple tissues due to the differentiation and dedifferentiation of cells, multiple histological findings, and difficult classification, which can lead to the final diagnosis. Aquaporin (AQP) is involved in the development of salivary gland and its water transport function. This year, Professor Takashi Takada of Hiroshima University provided information on the origin of polymorphic gonadal PA-hTERT. The origin of pleomorphic gonadal epithelial cells is examined by immunohistochemical staining. Next, PA-hTERT cell differentiation direction detection, cell polarity analysis Specific epithelial cells and lumen side development of tight junction composed of ZO-1, claudin-1, claudin-2, occludin and amylase secretion, immunostaining, transmission electron microscopy, Western blotting detection. As a result, ZO-1 and claudin-1 were strongly detected between cell processes by immunofluorescence staining. Western blotting is the expression of amylase. Ultrastructural observation is the expression of intracellular intermediate filament mitochondria. The expression of Ca ^<2 +>, tight junction protein and amylase was induced. AQP5, AQP6 were detected by immunoluminescent staining. AQP6 was detected by cell membrane and cytoplasmic staining. Now, AQP6 antibody can be used to inhibit the secretion of protein.