難治性口腔粘膜疾患におけるT細胞活性化制御システムの解明

阐明顽固性口腔粘膜疾病中T细胞激活控制系统

• 批准号: 17791441
• 负责人: 櫻井 仁亨
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791441/
• 关键词: 口腔扁平苔癬; シェーグレン症候群; T細胞

口腔扁平苔癬の検体は66検体得られた。平均年齢58.0歳±15歳、男女比1:5であった。免疫組織学的検討を行ったところ、ヘキスト33258を用いた蛍光抗体法、DABを用いた酵素抗体法両者においてFOXP3の発現を確認することが出来なかった。DABを用いた酵素抗体法においてはCD3,CD4,CD8発現は確認することが出来た。次に、FOXP3の発現の有無を確認するためにRT-PCR法を用いて解析を試みた。免疫染色用に採取した凍結組織切片よりRNAを回収するためQIAGEN社のRNeasy Mini Kitを用いてRNAの回収を行った。回収できるRNA量は一定していないが、約56%の確立で回収が可能となった。FOXP3のプライマーをデザインし、その発現を現在解析中である。シェーグレン症候群患者の小唾液腺は20検体得られている。扁平苔癬でのFOXP3発現解析の結果に応じて解析を行う予定である。予定された実験計画に対して、臨床検体として末梢血を得ることが出来なかったため、小組織片を用いた解析のみ行った。小組織片は比較的順調に得ることが出来るシステムを確立した。抑制性T細胞としてFOXP3陽性細胞の同定が出来ていないことが大きな問題点である。遺伝子レベルでの発現を再確認しつつ、手技的な問題も再度検討し引き続き研究を継続する予定である。

获得了66个口服地衣平面标本。平均年龄为58.0岁±15岁，男女比例为1：5。免疫组织学研究表明，使用HOECHST 33258的荧光抗体法和使用DAB的酶抗体法证实了FOXP3的表达。 CD3，CD4和CD8表达可以在酶抗体法中使用DAB确认。接下来，尝试使用RT-PCR进行分析以确认存在或不存在FOXP3表达。为了从收集的用于免疫染色的冷冻组织切片中收集RNA，使用Qiagen的RNeasy Mini Kit收集RNA。可以恢复的RNA的量不是恒定的，但是恢复的可能性为56％。已经设计了FOXP3的底漆，目前正在分析其表达。已经获得了二十个sjogren综合征患者的小唾液腺。该分析将根据地衣平面中Foxp3表达分析的结果进行。由于无法作为计划实验设计的临床标本获得外周血，因此仅使用小组织片进行了分析。我们建立了一个系统，可以相对平稳地采集小组织碎片。一个主要问题是，FoxP3阳性细胞无法识别为抑制性T细胞。在重申遗传水平的表达时，我们计划重新检查手动问题并继续我们的研究。