腫瘍特異的TIMP遺伝子導入による口腔扁平上皮癌浸潤・転移の抑制

肿瘤特异性TIMP基因导入抑制口腔鳞状细胞癌侵袭和转移

基本信息

批准号：
17791490
负责人：
衣笠有里子
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791490/
关键词：
扁平上皮癌細胞株 TIMP 浸潤能 MMP 線維芽細胞高転移株口腔扁平上皮癌 COX-2 CD44 浸潤転移

项目摘要

本年度は、TIMPを癌細胞特異的に発現させることによる口腔癌浸潤・転移抑制療法の可能性を検討するための基礎実験として以下の解析を行った。1.In vitroの系として、線維芽細胞株WI-38およびMRC-5のTIMP産生能をwestern blot法およびELISA法にて解析するとともに、TIMP-2アンチセンスオリゴヌクレオチド(AS)およびCOX-2ASの遺伝子導入の影響について検討した。その結果、WI-38、MRC-5両細胞株ともにTIMP-2を発現しており、TIMP-2ASおよびCOX-2AS遺伝子導入によりその発現は抑制された。2.TIMP-2ASあるいはCOX-2ASを遺伝子導入した線維芽細胞の培養上清を口腔扁平上皮癌細胞(OSCC)株NAおよびHSC-4に加えてもOSCCの増殖能には影響をあたえず、72時間まで細胞障害性を認めなかった。3.TIMP-2 ASおよびCOX-2 AS処理した線維芽細胞の培養上清を用いてOSCCのインベージョンアッセイを行ったところ、OSCCの浸潤能は抑制された。4.これら上清を加えたOSCCのMMP-2活性を検討したところ、活性型MMP-2の減少を認めた。また、MMP-2活性化因子の一つであるMT1-MMPの発現についてフローサイトメトリーにて解析したところ、TIMP-2 ASはその発現に影響しなかった。5.口腔癌高率転移ヌードマウスモデル作成のために各種OSCC-GFP株を作成してクローニングしたところ、舌移植による腫瘍塊形成および100%頚部リンパ節に転移するSAS-L1転移モデルを構築した。上記結果より、TIMP-2 ASは線維芽細胞のTIMP-2産生を抑制し、MMP-2活性抑制を介してOSCCの浸潤能を低下させることが示唆された。現在、癌細胞特異的TIMP-2発現ベクターを作成中であり、上記5の高転移モデルでの応用を検討している。

今年，进行了以下分析作为基本实验，以研究口腔癌入侵和转移抑制疗法的可能性，通过在癌细胞中特异性表达TIMP。 1。作为一种体外系统，使用蛋白质印迹和ELISA方法分析了成纤维细胞WI-38和MRC-5的TIMP产生能力，并检查了TIMP-2反义寡核苷酸（AS）和COX-2A的基因转移的影响。结果，WI-38和MRC-5细胞系都表达了TIMP-2，并且TIMP-2AS和COX-2AS基因的转导抑制了其表达。 2。将用TIMP-2AS或COX-2AS转染的成纤维细胞的培养上清液添加到口腔鳞状细胞癌细胞（OSCC）菌株Na和HSC-4菌株不影响OSCC的增殖能力，并且直到72小时才观察到细胞毒性。 3。使用TIMP-2 AS和COX-2 AS处理的成纤维细胞的培养上清液进行OSCC的入侵测定，并抑制OSCC的侵袭能力。 4。当检查了具有这些上清液的OSCC的MMP-2活性时，观察到活动MMP-2的降低。此外，当通过流式细胞仪分析MMP-2激活剂之一MT1-MMP的表达时，TIMP-2不影响其表达。 5。制备各种OSCC-GFP菌株并克隆以创建裸小鼠口腔癌模型，并构建了SAS-L1转移模型，其中通过舌移植和转移通过舌质形成和转移是100％宫颈淋巴结的转移。以上结果表明，TIMP-2抑制成纤维细胞中的TIMP-2产生，并通过抑制MMP-2活性来降低OSCC的侵入性能力。目前，正在制备癌细胞特异性的TIMP-2表达载体，并在上述5个高转移模型中研究了应用。