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腫瘍特異的TIMP遺伝子導入による口腔扁平上皮癌浸潤・転移の抑制

肿瘤特异性TIMP基因导入抑制口腔鳞状细胞癌侵袭和转移

基本信息

批准号：
17791490
负责人：
衣笠有里子
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791490/
关键词：
扁平上皮癌細胞株 TIMP 浸潤能 MMP 線維芽細胞高転移株口腔扁平上皮癌 COX-2 CD44 浸潤転移

项目摘要

本年度は、TIMPを癌細胞特異的に発現させることによる口腔癌浸潤・転移抑制療法の可能性を検討するための基礎実験として以下の解析を行った。1.In vitroの系として、線維芽細胞株WI-38およびMRC-5のTIMP産生能をwestern blot法およびELISA法にて解析するとともに、TIMP-2アンチセンスオリゴヌクレオチド(AS)およびCOX-2ASの遺伝子導入の影響について検討した。その結果、WI-38、MRC-5両細胞株ともにTIMP-2を発現しており、TIMP-2ASおよびCOX-2AS遺伝子導入によりその発現は抑制された。2.TIMP-2ASあるいはCOX-2ASを遺伝子導入した線維芽細胞の培養上清を口腔扁平上皮癌細胞(OSCC)株NAおよびHSC-4に加えてもOSCCの増殖能には影響をあたえず、72時間まで細胞障害性を認めなかった。3.TIMP-2 ASおよびCOX-2 AS処理した線維芽細胞の培養上清を用いてOSCCのインベージョンアッセイを行ったところ、OSCCの浸潤能は抑制された。4.これら上清を加えたOSCCのMMP-2活性を検討したところ、活性型MMP-2の減少を認めた。また、MMP-2活性化因子の一つであるMT1-MMPの発現についてフローサイトメトリーにて解析したところ、TIMP-2 ASはその発現に影響しなかった。5.口腔癌高率転移ヌードマウスモデル作成のために各種OSCC-GFP株を作成してクローニングしたところ、舌移植による腫瘍塊形成および100%頚部リンパ節に転移するSAS-L1転移モデルを構築した。上記結果より、TIMP-2 ASは線維芽細胞のTIMP-2産生を抑制し、MMP-2活性抑制を介してOSCCの浸潤能を低下させることが示唆された。現在、癌細胞特異的TIMP-2発現ベクターを作成中であり、上記5の高転移モデルでの応用を検討している。

This year, we will discuss the basis of TIMP specific discovery and the possibility of oral cancer invasion and metastasis inhibition therapy. 1. To investigate the effect of TIMP production by western blot and ELISA on the induction of COX-2 gene in vitro and in vitro. The results showed that WI-38 and MRC-5 cell lines inhibited TIMP-2 expression, TIMP-2AS expression and COX-2AS expression. 2. TIMP-2AS and COX-2AS were introduced into the culture supernatant of oral squamous cell carcinoma (OSCC) cell line NA and HSC-4. The proliferation of OSCC cells was affected by TIMP-2AS and COX-2AS. 3. TIMP-2 AS and COX-2 AS can inhibit the infiltration of OSCC in the supernatant of cultured cells. 4. The increase of MMP-2 activity in OSCC and the decrease of MMP-2 activity in OSCC were investigated. The expression of MT1-MMP and TIMP-2 AS is influenced by the activation of MMP-2. 5. The high rate of oral cancer migration and the establishment of SAS-L1 migration. The above results indicate that TIMP-2 AS inhibits TIMP-2 production in vascular cells, and MMP-2 activity inhibits OSCC infiltration. Now, cancer cell-specific TIMP-2 expression is in the process of being created, and the high-level shift in TIMP-2 expression is discussed above.