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モディフィコーム解明に向けての基盤研究

阐明 modicomb 的基础研究

基本信息

批准号：
17681025
负责人：
松山晃久
金额：
$ 9.98万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17681025/
关键词：
プロテオーム翻訳後修飾分裂酵母

项目摘要

タンパク質の翻訳後修飾はタンパク質の活性調節や分解の制御など、タンパク質そのものの機能にとって重要であるだけなく、細胞内シグナル伝達においても重要な役割を果たしている。しかし、個々のタンパク質についての翻訳後修飾の解析は進んでいるものの、その全体像はまだ不明である。そこで本研究では解析の対象をプロテオームに拡大し、タンパク質翻訳後修飾の全体像(モディフィコーム)を解明するための基盤となる技術開発をおこなった。これまでの研究において、分裂酵母で予測されている約5,000種類の全ORFの3'末端にFLAGおよびHis_6タグを融合させて発現できるようにした株から、His_6タグを利用して各発現タンパク質をハイスループットに精製する系を構築していた。本年度はその検出系にもさらに改良を加え、これまでよりも10倍程度高い感度でシグナルを検出できるようになった。このようにして確立した実験系を用いて実際に発現させた約5,000種類のタンパク質の精製をおこなった。精製したタンパク質を用いて1枚当たり1,536スポットからなるプロテインアレイを作製し、現在約100種類に及ぶ翻訳後修飾を特異的に認識する抗体で順次検出をおこなっている。各遺伝子を過剰発現した細胞から抽出した全細胞抽出液を用いて電気泳動をおこない、同様の抗体で検出するスクリーニングもおこなったが、精製タンパク質によるプロテインアレイを用いた方法では電気泳動法よりもはるかに多くのタンパク質の翻訳後修飾を検出できることがわかった。まもなく完成するこの第一次モディフィコームマップにより、細胞内タンパク質の翻訳後修飾に関する情報が飛躍的に増加することが予想され、個々のタンパク質の機能解析にも有用な情報が提供できると期待される。

After the transformation of the protein, the activity of the protein is regulated, the decomposition of the protein is controlled, the function of the protein is controlled, and the intracellular structure is controlled. The whole picture is unclear. Therefore, this research is based on the technical development of expanding the object to be analyzed and explaining the whole image ( In this study, about 5,000 species of complete ORFs were predicted to be fused at the 3'end of the genome with FLAG and His_6, and a system was constructed to refine and utilize each ORF. This year, the company's detection system was improved, and the sensitivity was increased by 10 times. This is the first time that we've had a chance to develop a system that's about 5,000 different kinds of products. The antibody was produced in sequence with about 100 species and a few post-conversion modifications. Each gene is detected by electrokinetic method, and the same antibody is detected by electrokinetic method. For the first time in the past, the information about the post-transformation modification of the cell quality has been increased, and the useful information about the functional analysis of the cell quality has been provided.