Target identification of proteins and small molecules using the fission yeast ORFeome

使用裂殖酵母 ORFeome 目标鉴定蛋白质和小分子

基本信息

  • 批准号:
    22K05361
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.58万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    2022
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2022-04-01 至 2026-03-31
  • 项目状态:
    未结题

项目摘要

タンパク質は主に他のタンパク質と物理的に相互作用することによって機能し、相互作用の変化はタンパク質の機能および病状等の変化を引き起こす。特定のタンパク質の機能を解析するにあたり、それがどのようなタンパク質と相互作用するのかを明らかにすることは非常に重要であることから、これまで、出芽酵母の2-ハイブリッドシステムや、プルダウンとLC-MSを組み合わせた生化学的な方法など、様々な方法が開発されてきたが、どの方法にも一長一短があり、新たな解析法を開発し、解析手段の選択肢を増やすことは重要である。そこで本研究では、タンパク質-タンパク質間相互作用を解析するための方法として、近年注目されているNanoBiT発光補完法を、分裂酵母の全遺伝子ライブラリーと組み合わせることで、タンパク質の相互作用相手を網羅的にスクリーニングする実験系を開発することを目指した。初年度は、本スクリーニング系を分裂酵母で構築するために、分裂酵母株および発現ベクターの開発を中心に行った。本実験系は深海エビのルシフェラーゼを改変したLgBiT断片と、それに低親和性で結合して機能するSmBiTペプチドとのスプリット系であるため、それぞれをORFと融合可能で、かつ、分裂酵母の染色体に挿入できるようなベクターを開発した。さらにこのような実験系で常に問題となる、タグ融合時における立体障害等の問題を可能な限り回避できるように、遺伝子をLgBiTと融合させる際にORFの5'末端にLgBiTを融合させるタイプの発現ベクターと、3'末端に融合させるタイプのベクターを別々に用意し、これらを同時に1つの株に発現できるようにした。また、これらのベクターを染色体に挿入して融合タンパク質を発現できるように、CRISPR/Cas9のシステムを用い、lys1およびarg3遺伝子のORF内に変異を有する株を作製した。
The nature of the substance is related to the nature of the substance and the interaction between the substance and the physical substance. The function analysis of specific substances is very important. The method of 2-D synthesis of budding yeast and LC-MS is very important. The analysis method is very important. In this study, we have developed a method for analyzing mass-to-mass interactions, which has attracted much attention in recent years. We have developed a new method for analyzing mass-to-mass interactions, which is called NanoBiT light complement method, and a new method for analyzing mass-to-mass interactions. In the beginning of the year, the yeast strain was constructed and the development center was established. The present invention relates to the development of LgBiT fragments, low affinity binding and functional SmBiT selection and selection systems in deep sea environments, including ORF fusion possibilities, chromosome insertion, and fission yeast chromosome insertion. In this case, the system is often subject to problems such as stereo damage, etc., which may be avoided, transmitted, LgBiT, fused, 5'end of ORF, LgBiT, fused, 3' end of ORF, fused, 3'end of ORF, fused, etc., at the same time, 1' plant, fused, etc. In addition, CRISPR/Cas9 gene expression system, Lys1 gene expression system and arg3 gene expression system were also studied.

项目成果

期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
分裂酵母の新規染色体挿入型ベクターの開発
裂殖酵母新型染色体插入型载体的开发
  • DOI:
  • 发表时间:
    2023
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    松山晃久;橋本敦史;西村慎一;吉田稔
  • 通讯作者:
    吉田稔
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松山 晃久其他文献

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  • DOI:
  • 发表时间:
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  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    菅長 昭文; 西村 慎一;松山 晃久;吉田 稔;Makoto Nagata
  • 通讯作者:
    Makoto Nagata
全タンパク質の電気泳動度データベース:Mobilitome
所有蛋白质的电泳迁移率数据库:Mobilitome
翻訳因子eIF5Aによるエネルギー代謝制御
翻译因子 eIF5A 调节能量代谢
  • DOI:
  • 发表时间:
    2016
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    近藤 直子;白井 温子;松山 晃久;夏目 徹;堂前 直;浜本 牧子;吉田 稔
  • 通讯作者:
    吉田 稔
分裂酵母における栄養源感受性変異株の探索と解析
裂殖酵母营养敏感突变株的筛选与分析
  • DOI:
  • 发表时间:
    2020
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    三浦 俊一;八代田 陽子;西村 慎一;松山 晃久;吉田 稔
  • 通讯作者:
    吉田 稔
奇数鎖脂肪酸は分裂酵母において細胞膜極性と細胞分裂に異常を引き起こす
奇数链脂肪酸导致裂殖酵母细胞膜极性和细胞分裂异常
  • DOI:
  • 发表时间:
    2021
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    星川陽次郎;西村慎一;松山 晃久;Li Sheena;八代田 陽子;Boone Charles;吉田 稔
  • 通讯作者:
    吉田 稔

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    $ 2.58万
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    2023
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    $ 2.58万
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    2023
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    2023
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  • 批准号:
    22KJ1622
  • 财政年份:
    2023
  • 资助金额:
    $ 2.58万
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  • 资助金额:
    $ 2.58万
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