表現型・遺伝子発現パターンに基づくマウス体細胞クローン着床期異常の原因究明

基于表型和基因表达模式研究小鼠体细胞克隆植入阶段异常的原因

• 批准号: 17700382
• 负责人: 井上 貴美子
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17700382/
• 关键词: 体細胞クローン; 胎盤; 定量RT-PCR; 遺伝子発現; 胎盤外円錐; FGF4; 胎盤形成

本年度は主に体細胞クローン技術により作製された初期胚を用いて胎盤関連遺伝子の定量RT-PCRによる発現量の解析を行った。正確な発現データを取るために、解析には単一胚を検体として用いることとした。単一胚の転写産物は非常に微量であるため、IVTによる増幅方法、SPIAプライマーを用いるRibo-SPIA増幅方法の検討を行った。結果としてIVTによる増幅法が増幅をしないサンプルと比較して定量解析の再現性があることや、多量の増幅産物が得られることから、遺伝子発現量の解析にはIVT増幅サンプルを用いた。定量に利用した遺伝子は未分化栄養膜細胞の増殖因子であるFGF4、その他の胎盤形成に関わる遺伝子であるFGFR2(IIIb、IIIc)、細胞の多能性維持に関与する転写因子であるOct4、同様に未分化細胞での発現が確認されている転写因子Sox2そして内部コントロールとしてChuk、Gapdh、Hprtの測定値をを利用した。その結果、調べた全ての検体(体外受精胚9個、卵丘細胞クローン胚9個)について、FGF4の発現が確認され、また発現量もGapdhをコントロールとした場合を除き、体外受精胚に比べ高いという予想外の結果が得られた。また他の遺伝子FGFR2(IIIb,IIIc)、Oct4、Sox2もクローン胚の方が有意に高いことが明らかとなった。Gapdhについては、他の二種類のコントロールに対しクローン胚における絶対値が2倍以上高く、このことが発現量の差を打ち消してしまうためと考えられた。すなわち、FGF4の発現低下が胎盤形成不全の原因になっていると予想したのとは全く逆で、総じて遺伝子発現量は体外受精胚よりクローン胚の方が高いことが明らかになった。現在は、この遺伝子発現亢進がどのように今後の着床、胎盤形成に関わって来るのかを明らかにすべく、抗体染色を用いた組織的解析を行っているところである。

This year, the main somatic cell technology was used to analyze the expression of placental related genes in embryonic embryos. The correct answer is: The product of a single embryo is very small, IVT is very large, SPIA is very small, and Ribo-SPIA is very small. The results show that the IVT amplitude increase method can be used to analyze the reproducibility of quantitative analysis. Quantitative analysis of FGF4, FGFR2 (IIIb, IIIc), FGF4, FGF2, FGF2, FGF4, FGF2, FGF3, FGF4, FGF2, FGF4, FGF4, FGF The results showed that the total number of embryos (9 IVF embryos and 9 cumulus cell embryos) was adjusted, and the detection of FGF4 was confirmed. The detection amount of Gapdh was determined. In addition, the results of IVF embryos were higher than those of normal embryos. FGFR2(IIIb,IIIc), Oct4, Sox2, etc. Gapdh, the absolute value of the two types of condon-to-condon-to-condon-to The low level of FGF4 expression is the cause of incomplete placenta formation. The high level of FGF4 expression is the cause of incomplete placenta formation. Now, this gene appears to be hyperactive, and the future implantation, placenta formation, and tissue analysis with antibody staining are carried out.

项目成果

Inefficient reprogramming of hematopoietic stem cells genome following nuclear transfer.

核移植后造血干细胞基因组的低效重编程。

• 发表时间: 2006
• 期刊: J Cell Sci. 15
• 作者: Kanatsu-Shinohara M.;Inoue K. et al.;Inoue K. et al.
• 通讯作者: Inoue K. et al.

Intra-strain polymorphisms are detected but no genomic alteration is found in cloned mice.

检测到品系内多态性，但在克隆小鼠中未发现基因组改变。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Biochem Biophys Res Commun 15
• 作者: Gotoh K.;Inoue K.et al.
• 通讯作者: Inoue K.et al.

再生医療のための分子生物学 核移植クローンとリプログラミング

再生医学分子生物学核转移克隆和重编程

• 发表时间: 2006
• 作者: 井上貴美子;小倉淳郎
• 通讯作者: 小倉淳郎

Variation in gene expression and aberrantly regulated chromosome regions in cloned mice

• DOI: 10.1095/biolreprod.105.044958
• 发表时间: 2005-12-01
• 期刊: BIOLOGY OF REPRODUCTION
• 影响因子: 3.6
• 作者: Kohda, T;Inoue, K;Ishino, F
• 通讯作者: Ishino, F

Chorioallantoic placenta defects in cloned mice.

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2006.08.057
• 发表时间: 2006-10
• 期刊: Biochemical and biophysical research communications
• 影响因子: 3.1
• 作者: N. Wakisaka-Saito;T. Kohda;K. Inoue;N. Ogonuki;H. Miki;Takafusa Hikichi;E. Mizutani;T. Wakayama;T. Kaneko-Ishino;A. Ogura;F. Ishino