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ミトコンドリア病態モデルマウスを利用した核移植による発生工学的治療法の開発

利用线粒体疾病模型小鼠进行核移植开发发育工程疗法

基本信息

批准号：
15700317
负责人：
井上貴美子
金额：
$ 1.6万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、ミトコンドリアDNA (mtDNA)の含有量が少ないと推測される第1極体の核移植を行い、産仔を得ることに成功した。第1極体は第一減数分裂時に放出される構造物であり、その細胞質内には雌の染色体が含まれており、遺伝情報としては卵子と等価である。また、放出後には退行する運命にあるため、その細胞質成分は貧しく、ミトコンドリアの含有量も少ないことが期待される。一方で、その退行していくという性質から、非常に細胞膜が壊れやすく、核移植のドナーとしては利用が困難である。そこで、第1極体を効率的な核ドナーとして使用すべく、様々な培養条件下で移植方法を探索した。ここまでのところ、以下の条件が最も適していることが分かっている。1.採卵方法採卵はGV卵期に行い、試験管内成熟(IVM)を行う。採卵とIVMを行う培地は浸透圧の高いTYH培地を使用し、卵丘細胞をはずした裸化卵子として培養を行うと、第1極体が退行しにくいことが明らかとなった。2.融合方法採卵12時間後、第1極体の移植を行う。核移植法は第2減数分裂期卵子をサイトカラシン存在下で除核した後、センダイウイルスによって行う。電気パルスによる融合は極体へのダメージが大きく、退行が早まってしまうため第1極体の移植方法としては適していない。3.受精方法体外受精(IVF)は卵丘細胞裸化卵子を用いた受精率が低いこと、除核や融合による膜へのダメージが受精率に影響を与えることから、この方法には適していないことが明らかとなった。一方顕微授精(ICSI)による方法は翌日の分割率が高く、確実な受精が行える。以上の方法を採用して、これまでに第1極体を核ドナーとした産仔が7.4%の割合で得られた(2/27:産仔数/移植胚数)。現在、これらのマウスを用いて、未受精卵子の核移植により得られたマウスと核移植由来mtDNAの含有量を比較している。

This year, the amount of DNA (mtDNA) in the first polar body was estimated to be less than that in the first polar body. The first polar body is released during the first meiosis, and the female chromosome is contained in the cytoplasm. After release, the cytoplasm of the cells is depleted and the content of the cells is reduced. The nature of nuclear transplantation is difficult to use. To explore transplantation methods under culture conditions, the first and second polar bodies were used to determine the efficiency of transplantation. The following conditions are most appropriate: 1. Methods of egg collection: egg collection in the middle of GV egg stage, in vitro maturation (IVM). IVM is used to culture eggs, cumulus cells are used to culture eggs, and the first body is used to culture eggs. 2. After 12 hours of egg collection, the first polar body was transplanted. Nuclear transfer method: In the presence of meiosis 2 eggs, the nucleus is removed, and the nucleus is transferred. The method of transplanting the first polar body is suitable for the first time. 3. Fertilization method In vitro fertilization (IVF) cumulus cells naked eggs used in the fertilization rate is low, except nuclear fusion, membrane and other factors affect the fertilization rate, this method is suitable for ICSI is a method for determining the rate of split on the next day. The number of litters per embryo transferred was 7.4% when the above methods were used. Now, we can compare the mtDNA content of unfertilized eggs with that of unfertilized eggs.