酸化LDLが個々の単球の浸潤及び内皮細胞VE-cadherin動態に及ぼす影響

氧化LDL对个体单核细胞浸润和内皮细胞VE-钙粘蛋白动力学的影响

• 批准号: 17700411
• 负责人: 橋本 謙
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kawasaki Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17700411/
• 关键词: 動脈硬化; 血管内皮細胞; 単球; PECAM-1; VE-cadherin; 浸潤動態; 酸化LDL; 循環生理学

動脈硬化初期過程における我々の研究から,酸化LDLは血管内皮細胞間隙分子の発現制御(PECAM-1の増強,VE-cadherinの抑制)により細胞間隙を単球が浸潤し易い状態に変化させ,それにより,単球の接着→浸潤開始のstepが特異的に促進されることが明らかとなった(Hashimoto K et al., Atherosclerosis 2007,in press).本研究では,単球浸潤時のPECAM-1,VE-cadherinの分子動態を生細胞において直接観察することを目的として,当初は3種類の分子(酸化LDL,単球CD14,VE-cadherinor PECAM-1)の同時抗体染色を想定していた.しかし,膜貫通タンパクであるPECAM-1(VE-cadherin)の抗体による細胞外ドメイン標識は,単球浸潤の障害になる可能性がある為,代替法として,これらの分子の細胞内ドメインに別色の蛍光タンパク(GFP, DsRed)を付加した組み換えベクターを作製し,内皮細胞及び単球に発現させることにより,細胞外での分子相互作用を阻害せずに両分子の動態を直接観察することを試みた.本年度は,PECAM-1に着目し,常法(RNA抽出,逆転写,PCR増幅,ベクターligation,コロニー選択,プラスミド精製,塩基配列確認)によりPECAM-1-GFP(緑)及びPECAM-1-DsRed(赤)の発現ベクターを構築した.次に,様々な遺伝子導入法を検討した結果,Nucleofection法(Amaxa社)により高効率・低毒性にてベクターを導入・発現させることに成功した.現在,これらを発現させた細胞の機能確認(形態,増殖能,発現分子の局在確認,分子量確認等)を行っており,これらの細胞を用いて,共焦点レーザー顕微鏡による3次元浸潤動態観察を行い,両分子の役割を直接的に検証する予定である.

In our study on the early stages of atherosclerosis, acidified LDL inhibited the development of vascular endothelial cell gap molecules (PECAM-1 enhancement,VE-cadherin inhibition), which changed the state of cell gap infiltration from single ball to single ball, and promoted the step-by-step process from single ball to infiltration initiation (Hashimoto K et al., Atherosclerosis 2007,in press). In this study, the molecular dynamics of PECAM-1 and VE-cadherin during cell infiltration were investigated directly. In this study, three kinds of molecules (acidified LDL, CD14, VE-cadherin PECAM-1) were simultaneously stained with antibodies. PECAM-1 The extracellular labeling of the antibody (VE-cadherin) may be detrimental to cell infiltration, but instead, the intracellular labeling of this molecule may be of a different color.(GFP, DsRed)- This year,PECAM-1 has been focused on the construction of PECAM-1-GFP(green) and PECAM-1-DsRed(red) by conventional methods (RNA extraction, reverse transcription,PCR amplification, selection, purification, and gene alignment confirmation). Second, the Nucleofection method (Amaxa) was successful in introducing and developing DNA with high efficiency and low toxicity. Now, we can confirm the function of these cells (morphology, growth ability, molecular structure, molecular weight, etc.).

项目成果

第1章 腎臓病の分子生物学 3.ナノ/マイクロテクノロジーからみた内皮細胞と単球のinteraction、「先端医療シリーズ31 腎臓病 -診断と治療の最前線」

第一章肾脏疾病的分子生物学3.纳米/微米技术视角下的内皮细胞与单核细胞的相互作用，《高级医学系列31肾脏疾病-诊治前线》

• 发表时间: 2005
• 作者: 片岡則之;橋本謙;梶谷文彦(分担執筆)
• 通讯作者: 梶谷文彦(分担執筆)

Assessment of the mechanical properties of the nucleus inside a spherical endothelial cell based on microtensile testing

• DOI: 10.2140/jomms.2007.2.1087
• 发表时间: 2007-06-01
• 期刊: JOURNAL OF MECHANICS OF MATERIALS AND STRUCTURES
• 影响因子: 0.9
• 作者: Deguchi, Shinji;Yano, Masayuki;Tsujioka, Katsuhiko
• 通讯作者: Tsujioka, Katsuhiko

Flow-induced hardening of endothelial nuclei as an intracellular stress-bearing organelle

流动诱导的内皮细胞核硬化作为细胞内的应激细胞器

• 发表时间: 2005
• 期刊: Journal of Biomechanics 38
• 作者: S Deguchi;K Maeda;T Ohashi;M Sato
• 通讯作者: M Sato

Oxidized LDL Specifically Promotes the Initiation of Monocyte Invasion at Cell-Cell Junctions by Changing the Intracellular Distribution of PECAM-1

氧化 LDL 通过改变 PECAM-1 的细胞内分布，特异性促进细胞-细胞连接处单核细胞侵袭的启动

• 发表时间: 2006
• 作者: S. Miyayama;et. al.;Hashimoto K.
• 通讯作者: Hashimoto K.

Oxidized LDL specifically promotes monocyte post-adhesion dynamics on endothelium, but not invasion itself at junctions, or subendothelial migration after invasion.

氧化的低密度脂蛋白特异性地促进单核细胞在内皮上的粘附后动力学，但不会促进其在连接处的侵袭，或侵袭后的内皮下迁移。

• 发表时间: 2005
• 作者: Shigehito;Wada;Kajiya M.;和田 重人;Hashimoto K.
• 通讯作者: Hashimoto K.