ホルモン合成と放出のバランス制御機構:単-LH細胞を用いた解析

激素合成与释放的平衡控制机制：单LH细胞分析

• 批准号: 18570060
• 负责人: 安東 宏徳
• 金额: $ 2.59万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18570060/
• 关键词: 黄体形成ホルモン; 単一細胞; 下垂体; 生殖腺刺激ホルモン放出ホルモン; 遺伝子発現; ホルモン分泌; サクラマス; 溶血プラークアッセイ; リアルタイムPCR

本研究の目的は,単一LH細胞を用いてLHの合成と放出のバランスをとる分子メカニズムを明らかにすることである。まず始めに,溶血プラークアッセイ法を用いてサクラマスの下垂体初代培養細胞から単一LH細胞を同定すると共に,LH放出活性の定量系を確立した。また,単一LH細胞のLH合成活性を測定するため,LHβサブユニットのmRNA定量系をリアルタイムPCR法を用いて確立した。最小検出感度は約100コピーであり,単一細胞中のLHβサブユニットmRNAの定量には十分の感度を持っていた。また,遺伝子の転写活性を測定する系として,ヘテロ核RNAを検出するリアルタイムPCR系を検討した。単一細胞のヘテロ核RNAの測定には最小検出感度に近いレベルでの精度のよい測定が必要であることが分かり,より精度よく安定して測定できるようにさらなる条件検討を行うことが必要である。サクラマスを非産卵期と産卵期前に採集し,単一LH細胞の合成と放出の解析系を用いて性成熟段階の異なる魚におけるバランス制御系の機能の違いを調べた。溶血プラークアッセイによって同定されたLH細胞の数は,非産卵期の魚は産卵期前の魚に比べて少なく,放出活性が低かった。また,リアルタイムPCR法によって測定したLHβサブユニットのmRNAも非産卵期では低かった。しかし,GnRHに対する反応性を調べると,非産卵期ではGnRH投与により放出と合成の活性が上昇したが,産卵期前では放出は高まったが合成は変化しなかった。産卵期前ではLHβサブユニット遺伝子の発現調節に関わる細胞内シグナル伝達系のGnRH応答性が変化することが示唆された。次に,ディファレンシャルディスプレイ法の一つであるGeneFishing法を用いて,両時期のLH細胞の間で発現量の異なる遺伝子の探索を行ったが,これまでのところ候補遺伝子は得られていない。使用した任意プライマーの数が少ないためと考えられる。

这项研究的目的是阐明使用单个LH细胞平衡LH合成和释放的分子机制。首先，使用溶液斑块测定法，从樱桃鲑鱼的原代垂体细胞中鉴定出单个LH细胞，并确定了LH释放活性的定量测定。此外，为了测量单个LH细胞的LH合成活性，使用实时PCR建立了LHβ亚基的mRNA测定系统。最小检测灵敏度约为100份，足以定量单细胞中的LHβ亚基mRNA。此外，研究了用于检测异核RNA的实时PCR系统，作为测量基因转录活性的系统。发现单个细胞中异核RNA的测量需要在接近最小检测灵敏度的水平上进行准确的测量，并且需要进一步研究条件以确保更准确，更稳定的测量。在非产卵和产卵之前收集了樱花鲑鱼，并使用分析系统合成和释放了单个LH细胞，研究了在性成熟的不同阶段，在鱼类中平衡控制系统的功能差异。在非蛋白鱼类中，通过溶血斑块测定的LH细胞数量小于在卵巢前鱼中的数量，并且释放活性较低。此外，在非产卵期间，通过实时PCR测量的LHβ亚基的mRNA也很低。但是，当研究了对GNRH的反应性时，GNRH给药增加了非蛋白质的释放和合成活性，但是在产卵季节之前的释放增加了，但合成不变。有人提出，在产卵季节之前，涉及调节LHβ亚基基因表达的细胞内信号传导系统的GNRH反应性。接下来，我们使用基因保存方法搜索了LH细胞之间具有差异表达水平的基因，该方法是差异显示方法之一，但到目前为止尚未获得候选基因。这被认为是因为所使用的可选引物的数量很少。

项目成果

ブタ味蕾に関する免疫組織化学的研究

猪味蕾的免疫组织化学研究

• 发表时间: 2007
• 作者: 堀江祐介;工藤健一;大島一郎;村上徹哉;尾野喜孝;西村正太郎;田畑正志
• 通讯作者: 田畑正志

Structure of bovine fungiform taste buds and their immunoreactivity for gustducin.

牛蕈状味蕾的结构及其对味素的免疫反应性。

• 发表时间: 2006
• 期刊: The Journal of Veterinary Medical Science 68
• 作者: Tabata s.;et al. (他4名)
• 通讯作者: et al. (他4名)

能登半島沿岸の海水中のトリブチルスズ濃度測定と海洋細菌によるトリブチルスズの浄化の試み

测量能登半岛沿岸海水中的三丁基锡浓度并尝试利用海洋细菌纯化三丁基锡

• 发表时间: 2008
• 期刊: 日本海域研究 39
• 作者: 鈴木信雄;(他5名)
• 通讯作者: (他5名)

Carcass composition and skeletal muscle distribution in broilers produced under different nutritional regimes - 3. Male broilers showing maximum early growth and restricted later growth.

不同营养方案下生产的肉鸡的胴体成分和骨骼肌分布 - 3. 雄性肉鸡表现出最大的早期生长和有限的后期生长。

• 发表时间: 2008
• 期刊: Journal of the Faculty of Agriculture, Kyushu University 53
• 作者: Das;C.;et al.;(他6名)
• 通讯作者: (他6名)

Carcass composition and skeletal muscle distribution in broilers produced under different nutritional regimes-1.Male at three weeks of age

不同营养方案下生产的肉鸡的胴体成分和骨骼肌分布-1.三周龄雄性

• 发表时间: 2008
• 期刊: Journal of the Faculty of Agriculture, Kyushu University 53
• 作者: Das;C.;et. al.(他6名)
• 通讯作者: et. al.(他6名)