口腔がんにおけるリンパ管新生因子VEGF-C遺伝子発現調節機構の解明

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本年度はその目的と実施計画に従い、研究を逐行した。1.リンパ管内皮細胞の培養は安定して行い得た。市販培養細胞ではなく、ヒト皮膚微小血管内費細胞からの分離培養が安定して行い得た。2.リンパ管内皮細胞3次元培養による腫瘍リンパ管新生能の検定。リンパ管新生能を検定するためこの方法を選択したが、結果が不安定なため、リンパ管内皮細胞の増殖能を直接検定する方法に変更した。3.発現調節領域の構造と機能の解析(1)プロモーター解析を完了した。前年度より継続してルシフェラーゼアッセイにより発現を確認し、遺伝子導入細胞株により活性の差を確認した。(2)エンハンサー領域の同定を行った。最小領域の同定のためプロモーター単独での解析を行い、繰り返し配列も作成し、遺伝子導入の後活性の差をルシフェラーゼアッセイにて検定した。4.転写制御は既知の遺伝子によるものであり、解析は不要であった。5.リンパ管内皮細胞と口腔がん細胞株の共培養により、細胞株の違いによる増殖活性の違いを確認した。また、その活性の違いとマウス移植での転移能を検討し、その相関が判明した。6.VEGF-Cの過剰発現を生じる細胞株作成を行った。その結果得られた細胞株をマウスに移植するよう試みたが、過剰発現細胞株は-過性発現のものにおいては再現性のある結果が得られず、向上発現を行う細胞株の作成には至らなかった。以上の解析を行い、成果を次年度以降刊行される雑誌に投稿する。