ジーンサイレンシングにおける2本鎖RNA結合タンパク質の相互作用の解析

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RNAサイレンシングに関与する2本鎖RNA結合タンパク質としてDICERが良く知られている。DICERは別の2本鎖RNA結合タンパク質と相互作用することが多くの生物種で見出されている。これまでに、我々は、シロイヌナズナにおける2本鎖RNA結合モチーフを有するタンパク質(DCL1-4,HYL1/DRB1,DRB2,DRB4,DRB5)について生化学的な解析を行ってきた。本研究ではこれら2本鎖RNA結合タンパク質の生体内での相互作用や作用機序について免疫沈降法やHA-tag融合タンパク質を利用した解析を行った。その結果、野生型や、dcl4及びdrb4変異体を用いた免疫沈降実験によりDCL4とDRB4が生体内で相互作用しており、複合体を形成することが示された。さらに、HA-tag融合DRB4強制発現体およびHA-tag融合DCL4強制発現体を用いた解析から、細胞内ではDRB4がDCL4よりも非常に多量に存在しており、ほとんどのDCL4がDRB4と結合しているのに対し、DRB4はDCL4に結合しているDRB4よりも未結合もしくは他のタンパク質と結合しているDRB4が多く存在する可能性が示唆された。また、HA-tag融合DCLファミリー強制発現体を用いた実験から、DCL4-DRB4における相互作用が特異的であることが示唆されたが、微量ながら、DCL1-DRB4の結合が観察された。このことから、植物においては複数存在するDICERとHYL1/DRBファミリーの特異的な結合を中心としたいくつかの複合体が存在し,それぞれがジーンサイレンシング現象において分業を担っている可能性が考えられた。