イソロイシンtRNAのコドン特異性・アミノ酸特異性を決定する機構の構造的基盤

异亮氨酸 tRNA 密码子和氨基酸特异性决定机制的结构基础

• 批准号: 06J05669
• 负责人: 中西 孝太郎
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J05669/
• 关键词: 構造解析; RNA修飾酵素; 転写後修飾; 翻訳機構; RNA; 核酸結合タンパク質

今回の構造決定にいたるまでに,研究代表者は11種類の生物種からTilSの遺伝子をクローニングし、それら組換えタンパク質のh発現を大腸菌の系を用いて試みた.その結果,5つの生物種のTilSにおいて,その発現と可溶性画分での蓄積を確認した.さらに遺伝子データバンクを用いて,それら生物種のイソロイシンtRNA(tRNA^<Ile>_2)の遺伝子を検索,同定した.一般にデータバンクでは,アンチコドンの塩基配列によってtRNAの分類(そのtRNAがどのアミノ酸に対応しているのか)を分類している.tRNA^<Ile>_2の遺伝子tDNA^<Ile>_2のアンチコドンは,メチオニンtRNA(tRNA^<Met>)のものと同じCATであるため,tRNA^<Met>として登録されている.そこで,採用者はイソロイシンtRNA合成酵素のtRNA認識塩基をすべて有し,かつメチオニンtRNA合成酵素の認識塩基を持たないtRNAをtRNA^<Ile>_2と予想した.このような方法で選んだtDNA^<Ile>_2をT7プロモーターの下流にクローニングし,in vitro転写によってtRNA^<Ile>_2を調製した.最終的には,これらtRNAがTilSによってリシジン化されることを確認することによりtRNA^<Ile>_2であると判断した.これらの実験から採用者は2種類の生物種においてTilSとtRNA^<Ile>_2の複合体の結晶を得ることに成功した.しかしながら,一方の結晶では8Å以上の分解能の反射データを得ることができなかった.その結果,1生物種においてその結晶構造を分解能3.65Åで決定することに成功した.現在研究代表者らはこれらの結果をまとめ学術論文に投稿している.

In this paper, the structure of the study was determined by the representative of 11 species of organisms, including TilS gene, E. coli and E. coli. As a result, 5 species of organisms were identified as TilS and soluble fractions were identified as accumulation. In addition, the gene expression of tRNA(tRNA^<Ile>_2) in biological species was detected and determined. In general, tRNA is classified according to its base alignment. tRNA <Ile>^_2 is classified according to <Ile>its base alignment. tRNA <Met>^<Met>The tRNA recognition base of tRNA synthetase is not available to the adopters<Ile>. This method is to select tDNA^<Ile>_2 T7 and tRNA^ _2 in vitro<Ile>. Finally, the tRNA was identified as the most important factor in the process<Ile>. 2 species of biological species, TilS and tRNA^<Ile>_2 complex, were successfully crystallized. The crystal of a square is more than 8, and the decomposition energy is reflected. As a result, the crystal structure decomposition energy of 1 biological species was 3.65. Now the research representative is going to write the result of the academic paper.