I分子計測およびX線結晶構造解析による回転分子モーターV_1の回転メカニズムの研究

I 利用分子测量和X射线晶体结构分析研究旋转分子马达V_1的旋转机理

• 批准号: 06J08645
• 负责人: 今村 博臣
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J08645/
• 关键词: 蛍光イメージング; 蛍光共鳴エネルギー移動; ATP; 1分子計測; 分子モーター

V1-ATPaseと同様の回転分子モーターであるF1-ATPaseの活性制御サブユニットがATP結合に伴って構造変化するする性質を利用して,蛍光ATPプローブを作製した.このプローブは制御サブユニットに2つの蛍光団が結合しており,ATPの濃度に応じて2つの蛍光団の間で生じる共鳴エネルギー移動の効率が変化する.作製したプローブは,ATPに対して高い選択性を示し,ADPやGTPといった類似のヌクレオチドにはほとんど反応しなかった.また,εの生物種を変える事で,様々なアフィニティーのプローブが作製できる事が明らかとなった.また,アフィニティーを決定するために重要なアミノ酸残基も同定した.実際に蛍光ATPプローブを培養動物細胞に発現させ,顕微鏡下で細胞の蛍光を観察したところ,通常の培養条件では一定であった蛍光シグナルが,ATP合成阻害剤を加える事で大きく変化する様子が見られた.この事から,作製したATPプローブが実際の生体内のATP濃度をモニターできる事がわかった.この蛍光ATPプローブにシグナル配列を付加する事で,これまで細胞質の他に核,ミトコンドリア,細胞膜にプローブを局在化させる事に成功した.これらを用いて,さまざまなイベントにおける細胞内のATP濃度変化を今後明らかにして行く予定である.また,V1-ATPaseのようなATPを分解もしくは合成する酵素の研究にも用いて行く予定である.

In the same way, the V1-ATPase molecule is used to control the activity of the F1-ATPase. The ATP is combined with the chemical reaction of the compound, and the light ATP is used to make the device. In this paper, the general information system is used to determine the accuracy of the system. The system is based on the combination of the optical system, the ATP system, and the system. If you want to make sure that you have a choice, ATP will have an optional display, and that you will find that the ADP GTP response will be similar to that of the others. I don't know what to do, I don't know what to do, I don't know what to do. The acid residue is the same as that of the acid residue. In the light of the ATP system, the results show that the cells are sensitive, the cells are sensitive to light, and the general condition is that the ATP synthesis does not affect the performance of the system. If you want to pay attention to your health, you will have to pay attention to your ATP in your body. You will have to pay attention to your health. Please do something about it. This is the first time that the ATP has been installed, and that the cell has been successfully treated in the first place. In the future, we will determine the accuracy of the intracellular ATP concentration in the cell. V1-ATPase, V1-ATPase, ATP, decomposition, synthesis, enzyme, enzyme.

项目成果

Fluorescence imaging of intracellular ATP using a FRET-based probe

使用基于 FRET 的探针对细胞内 ATP 进行荧光成像

• 发表时间: 2008
• 作者: Norihiko L.Okamoto;Jung-Hwan Kim;Katsushi Tanaka;Haruyuki Inui;Susan M. Kauzlarich;N. L. Okamoto;N. L. Okamoto;S. Mehraeen;N. L. Okamoto;N. L. Okamoto;Koichi Kawamoto;Koichi Kawamoto;Koichi Kawamoto;Koichi Kawamoto;Koichi Kawamoto;今村博臣;Shinya Fushinobu;Hiromi Imamura;Hiromi Imamura
• 通讯作者: Hiromi Imamura

細胞内ATPを蛍光で可視化する

通过荧光可视化细胞内 ATP

• 发表时间: 2007
• 作者: Norihiko L.Okamoto;Jung-Hwan Kim;Katsushi Tanaka;Haruyuki Inui;Susan M. Kauzlarich;N. L. Okamoto;N. L. Okamoto;S. Mehraeen;N. L. Okamoto;N. L. Okamoto;Koichi Kawamoto;Koichi Kawamoto;Koichi Kawamoto;Koichi Kawamoto;Koichi Kawamoto;今村博臣;Shinya Fushinobu;Hiromi Imamura;Hiromi Imamura;今村博臣
• 通讯作者: 今村博臣

細胞内ATPの可視化

细胞内 ATP 的可视化

• 发表时间: 2007
• 作者: Norihiko L.Okamoto;Jung-Hwan Kim;Katsushi Tanaka;Haruyuki Inui;Susan M. Kauzlarich;N. L. Okamoto;N. L. Okamoto;S. Mehraeen;N. L. Okamoto;N. L. Okamoto;Koichi Kawamoto;Koichi Kawamoto;Koichi Kawamoto;Koichi Kawamoto;Koichi Kawamoto;今村博臣;Shinya Fushinobu;Hiromi Imamura;Hiromi Imamura;今村博臣;今村博臣;今村博臣
• 通讯作者: 今村博臣

Reconstitution in vitro of V1 complex of Thermus thermophilus V-ATPase revealed that ATP binding to the A subunit is crucial for V1 formation

• DOI: 10.1074/jbc.m608253200
• 发表时间: 2006-12-15
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Imamura, Hiromi;Funamoto, Saeko;Yokoyama, Ken
• 通讯作者: Yokoyama, Ken

FRETプローブを用いた生細胞内ATPの蛍光イメージング

使用 FRET 探针对活细胞中的 ATP 进行荧光成像

• 发表时间: 2007
• 作者: Norihiko L.Okamoto;Jung-Hwan Kim;Katsushi Tanaka;Haruyuki Inui;Susan M. Kauzlarich;N. L. Okamoto;N. L. Okamoto;S. Mehraeen;N. L. Okamoto;N. L. Okamoto;Koichi Kawamoto;Koichi Kawamoto;Koichi Kawamoto;Koichi Kawamoto;Koichi Kawamoto;今村博臣;Shinya Fushinobu;Hiromi Imamura;Hiromi Imamura;今村博臣;今村博臣
• 通讯作者: 今村博臣