転写因子Foxo1の核・細胞質間移動のバイオイメージングとシグナル伝達解析

1.バイオイメージングによるFoxo1の時空間的シグナル伝達解析過酸化水素刺激がFoxo1の核内移行を促進することをバイオイメージングによって発見した。さらに全く別の種類に属する転写因子KLF6がFoxo1と同様に過酸化水素刺激によって核内に移行すること、Foxo1とKLF6がそれぞれ異なる二箇所で結合することを見つけた。またFoko1とKLF6は相乗的に機能して共通のターゲット遺伝子であるp21waf/cip、Gadd45の転写量を増加させることを発見した。2.Foxo1のノックダウン解析Foxoファミリー転写因子のターゲット遺伝子であるp21waf/cipやGadd45はそれぞれストレス応答因子、DNA損傷応答因子である。培養ヒト臍帯静脈内皮細胞の内因性Foxo1、Foxo3、Foxo4をsiRNAでノックダウンしたところ、ノックダウン細胞とコントロールの細胞と間で、p21waf/cipとGadd45遺伝子のmRNA発現量には有意差はなかった。3.血管・心臓でのFoxo1のin vivo機能解析心筋特異的プロモーター(MHC)制御下にFoxo1の恒常活性型変異体(Foxo1-3A)を発現するMHC-Foxo1-3Aマウス(ヘテロ)を作製した。超音波を用いた検査ではMHC-Foxo1-3Aヘテロマウスの心機能や心筋の器質的変化はコントロールマウスと比べて差がなかった。また血管内皮細胞特異プロモーター(Tie2)制御下でFoxo1-3Aを発現するTie2-Foxo1-3Aマウスの作製を試みたが、親マウスの妊娠不全または胎生致死のためにヘテロマウスは誕生しなかった。

1.バイオイメージングによるFoxo1の時空間的シグナル伝達解析過酸化水素刺激がFoxo1の核内移行を促進することをバイオイメージングによって発見した。さらに全く別の種類に属する転写因子KLF6がFoxo1と同様に過酸化水素刺激によって核内に移行すること、Foxo1とKLF6がそれぞれ異なる二箇所で結合することを見つけた。またFoko1とKLF6は相乗的に機能して共通のターゲット遺伝子であるp21waf/cip、Gadd45の転写量を増加させることを発見した。2.Foxo1のノックダウン解析Foxoファミリー転写因子のターゲット遺伝子であるp21waf/cipやGadd45はそれぞれストレス応答因子、DNA損傷応答因子である。培養ヒト臍帯静脈内皮細胞の内因性Foxo1、Foxo3、Foxo4をsiRNAでノックダウンしたところ、ノックダウン細胞とコントロールの細胞と間で、p21waf/cipとGadd45遺伝子のmRNA発現量には有意差はなかった。3.血管・心臓でのFoxo1のin vivo機能解析心筋特異的プロモーター(MHC)制御下にFoxo1の恒常活性型変異体(Foxo1-3A)を発現するMHC-Foxo1-3Aマウス(ヘテロ)を作製した。超音波を用いた検査ではMHC-Foxo1-3Aヘテロマウスの心機能や心筋の器質的変化はコントロールマウスと比べて差がなかった。また血管内皮細胞特異プロモーター(Tie2)制御下でFoxo1-3Aを発現するTie2-Foxo1-3Aマウスの作製を試みたが、親マウスの妊娠不全または胎生致死のためにヘテロマウスは誕生しなかった。