転写因子Foxo1の核・細胞質間移動のバイオイメージングとシグナル伝達解析

转录因子 Foxo1 核质运动的生物成像和信号转导分析

• 批准号: 06J08806
• 负责人: 上岡 祐治 (2007)
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyoto University (2007)Osaka University (2006)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J08806/
• 关键词: イメージング; Foxo1; インスリン; シグナル伝達; FOXO; 血管内皮細胞

1.バイオイメージングによるFoxo1の時空間的シグナル伝達解析過酸化水素刺激がFoxo1の核内移行を促進することをバイオイメージングによって発見した。さらに全く別の種類に属する転写因子KLF6がFoxo1と同様に過酸化水素刺激によって核内に移行すること、Foxo1とKLF6がそれぞれ異なる二箇所で結合することを見つけた。またFoko1とKLF6は相乗的に機能して共通のターゲット遺伝子であるp21waf/cip、Gadd45の転写量を増加させることを発見した。2.Foxo1のノックダウン解析Foxoファミリー転写因子のターゲット遺伝子であるp21waf/cipやGadd45はそれぞれストレス応答因子、DNA損傷応答因子である。培養ヒト臍帯静脈内皮細胞の内因性Foxo1、Foxo3、Foxo4をsiRNAでノックダウンしたところ、ノックダウン細胞とコントロールの細胞と間で、p21waf/cipとGadd45遺伝子のmRNA発現量には有意差はなかった。3.血管・心臓でのFoxo1のin vivo機能解析心筋特異的プロモーター(MHC)制御下にFoxo1の恒常活性型変異体(Foxo1-3A)を発現するMHC-Foxo1-3Aマウス(ヘテロ)を作製した。超音波を用いた検査ではMHC-Foxo1-3Aヘテロマウスの心機能や心筋の器質的変化はコントロールマウスと比べて差がなかった。また血管内皮細胞特異プロモーター(Tie2)制御下でFoxo1-3Aを発現するTie2-Foxo1-3Aマウスの作製を試みたが、親マウスの妊娠不全または胎生致死のためにヘテロマウスは誕生しなかった。

1. バ イ オ イ メ ー ジ ン グ に よ る Foxo1 の space when シ グ ナ ル 伝 of parsed acidic water element to stimulate が Foxo1 の nuclear internal migration を promote す る こ と を バ イ オ イ メ ー ジ ン グ に よ っ て 発 see し た. さ ら に く don't の all kinds に genus す る planning write factor KLF6 が Foxo1 と with others in water acidification passes に element to stimulate に よ っ て in nuclei に transitional す る こ と, Foxo1 と KLF6 が そ れ ぞ れ different な る で combined by two す る こ と を see つ け た. ま た Foko1 と KLF6 は phase 乗 に function し て common の タ ー ゲ ッ ト posthumous son 伝 で あ る p21waf/cip, Gadd45 の planning write in を raised add さ せ る こ と を 発 see し た. 2. Foxo1 の ノ ッ ク ダ ウ ン parsing Foxo フ ァ ミ リ ー planning write factor の タ ー ゲ ッ ト posthumous son 伝 で あ る p21waf/cip や Gadd45 は そ れ ぞ れ ス ト レ ス 応 a factor, DNA damage 応 answer factor で あ る. Cultivate ヒ ト umbilical 帯 の venous endothelial cells endogenous Foxo1, Foxo3, Foxo4 を siRNA で ノ ッ ク ダ ウ ン し た と こ ろ, ノ ッ ク ダ ウ ン cells と コ ン ト ロ ー ル の cells between と で, p21waf/cip と traces of Gadd45 伝 son の mRNA 発 now quantity に は deliberately bad は な か っ た. 3. The vessel is crucial, the heart で の Foxo1 の function of in vivo analytical heart muscle specific プ ロ モ ー タ ー (MHC) under the system of imperial に Foxo1 の constant activity type 1 - (Foxo1-3 a) を 発 now す る MHC - Foxo1-3 a マ ウ ス (ヘ テ ロ) を cropping し た. Ultrasound を with い た 検 check で は MHC - Foxo1-3 a ヘ テ ロ マ ウ ス の heart function や heart muscle の is qualitative variations change は コ ン ト ロ ー ル マ ウ ス と than べ て poor が な か っ た. ま た vascular endothelial cell specific プ ロ モ ー タ ー (Tie2) under the system of imperial で Foxo1-3 - a を 発 now す る Tie2 - Foxo1-3 a マ ウ ス の cropping を try み た が, マ ウ ス の pregnancy is not complete ま た は viviparous death の た め に ヘ テ ロ マ ウ ス は born し な か っ た.