Genom-weite Analyse von RING-Finger-Proteinen der Hefe Saccharomyces cerevisiae

Die selektive Proteindegradation durch das Ubiquitin-Proteasom-System ist verantwortlich für die Regulation verbedener zellulärer Prozesse.通过对E1-、E2-和E3-酶的酶解作用，可使韦尔登蛋白质水解，从而使蛋白质在体内标记。通过E3-Ubiquitin-Ligasen，底物被识别和控制。E3-泛肽配体是一种高质量的蛋白质，锌复合物，也是一种环指蛋白质，在一百年内从真核细胞中分离。在我的工作中，我们使用了质谱仪的Interaktionspartner。利用DNA芯片技术的基因表达谱对缺失环指突变进行韦尔登，并利用缺失环指突变韦尔登库合成一个缺失环指突变的基因库。结果表明，E3-泛素-连接酶活性与最佳结合蛋白质和最佳结合韦尔登的结合是一种可靠的生化分析方法。

Die selektive Proteindegradation durch das Ubiquitin-Proteasom-System ist verantwortlich für die Regulation verschiedener zellulärer Prozesse. Durch die kovalente Bindung von Ubiquitinketten, die durch eine Enzymkaskade bestehend aus E1-, E2- und E3-Enzymen katalysiert wird, werden Zielproteine dieses Proteolysewegs für den Abbau markiert. Die Spezifität dieses Vorgangs wird durch E3-Ubiquitin-Ligasen, die Substrate erkennen und ubiquitinieren, kontrolliert. Einigen dieser E3-Ubiquitin-Ligasen ist eine hochkonservierte, Zink-komplexierende, sogenannte RING-Finger Domäne gemeinsam, die in hunderten von hypothetischen Proteinen aller Eukaryonten gefunden wird. In meiner Arbeit soll die zelluläre Funktion von unbekannten Hefe-RING-Finger Proteinen untersucht werden, indem mittels Massenspektrometrie Interaktionspartner bzw. gebundene Substrate identifiziert werden, mit Hilfe der DNA-Chip-Technologie Genexpressionsprofile von RING-Finger-Deletionsmutanten erstellt werden und mit Hilfe einer Deletionsgenbank nach synthetisch letalen Interaktionen mit RING-Finger-Deletionsmutanten gesucht wird. Die Ergebnisse dieser primären Analyse sollen mittels verschiedener biochemischer Ansätze wie Rekonstitution der E3-Ubiquitin-Ligase Aktivität mit rekombinanten Proteinen bestätigt und ergänzt werden.