Genom-weite Analyse von RING-Finger-Proteinen der Hefe Saccharomyces cerevisiae

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Die selektive Proteindegradation durch das Ubiquitin-Proteasom-System ist verantwortlich für die Regulation verschiedener zellulärer Prozesse. Durch die kovalente Bindung von Ubiquitinketten, die durch eine Enzymkaskade bestehend aus E1-, E2- und E3-Enzymen katalysiert wird, werden Zielproteine dieses Proteolysewegs für den Abbau markiert. Die Spezifität dieses Vorgangs wird durch E3-Ubiquitin-Ligasen, die Substrate erkennen und ubiquitinieren, kontrolliert. Einigen dieser E3-Ubiquitin-Ligasen ist eine hochkonservierte, Zink-komplexierende, sogenannte RING-Finger Domäne gemeinsam, die in hunderten von hypothetischen Proteinen aller Eukaryonten gefunden wird. In meiner Arbeit soll die zelluläre Funktion von unbekannten Hefe-RING-Finger Proteinen untersucht werden, indem mittels Massenspektrometrie Interaktionspartner bzw. gebundene Substrate identifiziert werden, mit Hilfe der DNA-Chip-Technologie Genexpressionsprofile von RING-Finger-Deletionsmutanten erstellt werden und mit Hilfe einer Deletionsgenbank nach synthetisch letalen Interaktionen mit RING-Finger-Deletionsmutanten gesucht wird. Die Ergebnisse dieser primären Analyse sollen mittels verschiedener biochemischer Ansätze wie Rekonstitution der E3-Ubiquitin-Ligase Aktivität mit rekombinanten Proteinen bestätigt und ergänzt werden.