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出芽酵母の小胞体・ゴルジ体に局在する機能未知必須膜タンパク質の解析

酿酒酵母内质网和高尔基体中功能未知的必需膜蛋白的分析

基本信息

批准号：
06J11506
负责人：
佐藤啓介
金额：
$ 1.79万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、主に必須遺伝子YDR367Wにコードされる機能未知膜タンパク質Ydr367Wの解析を行った。スフィンゴ脂質は、真核細胞の膜を構成する脂質で、セラミド骨格を有するものを指す。セラミドの新規合成は小胞体で行われ、さらにゴルジ体に運ばれて修飾を受ける。出芽酵母においては、イノシトールリン酸が付加されてIPCとなり、さらにマンノースが付加されてMIPCに、再びイノシトールリン酸が付加されてM(IP)_2Cとなる。この修飾の過程で、最初のIPC合成だけが酵母の生育に必須である。本研究ではYDR367Wの温度感受性変異株を作製してサプレッサースクリーニングを行い、AUR1を同定した。AUR1は、IPC合成を行うIPCシンターゼをコードすると報告されていた。両者の物理的相互作用を検証するため、膜を界面活性剤で可溶化し、免疫沈降実験を行った。その結果、Ydr367WとAur1がin vivoで複合体を形成することを見出した。野生株および温度感受性変異株からAur1を含むIPC合成酵素を免疫学的に精製し活性測定した結果、温度感受性変異株から精製したIPC合成酵素は野生型のものと比べほとんど活性を失っており、Ydr367WはIPC合成酵素活性に必須なサブユニットと推定された。さらに、Ydr367Wは一部がゴルジ体エンドプロテアーゼKex2によりプロセシングされていることを見出した。以上から、YDR367WをKEI1(Kex2-cleavable protein Essential for IPC synthesis 1)と命名した。以上の成果はアメリカ細胞生物学学会の発行する国際学術誌に投稿し、現在審査中である。

This year, the analysis of YDR 367 W, the main component of YDR 367 W, is carried out. The structure of lipid and eukaryotic membrane The new method for synthesizing small cells is described in detail below. In addition, the production of yeast, such as IPC_2C, IPC_2C, IPC_2C, This modification process, the initial IPC synthesis component and yeast reproduction must be completed. In this study, the temperature sensitivity of YDR367W was controlled and AUR1 was determined. AUR1, IPC, report The physical interaction of the two molecules is demonstrated by the solubility of the membrane surfactant and the immune deposition process. Ydr367W Aur1 in vivo complex formation Wild strains and temperature-sensitive mutants contain purified IPC synthase activity assay results and temperature-sensitive mutants contain purified IPC synthase activity assay results and wild-type IPC synthase activity assay results. Ydr 367W contains purified IPC synthase activity assay results. Ydr367W is a part of the company. YDR367W is KEI1(Kex2-cleavable protein Essential for IPC synthesis 1). The above results were submitted to the International Journal of Cell Biology and are currently under review.