植物微生物間相互作用における環状トリテルペノイド生合成酵素の役割

环状三萜生物合成酶在植物-微生物相互作用中的作用

• 批准号: 06J51012
• 负责人: 澤井 学
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J51012/
• 关键词: 環状トリテルペノイド; ミヤコグサ; lanosterol; オキシドスクアレン閉環酵素; ステロール; 植物微生物間相互作用; 形質転換植物

高等植物は、生存に必須なステロールを含む、多様な環状トリテルペノイドを生成する。その中には薬理活性、アレロパシー活性を示すものが含まれ、植物の成長・分化、根圏微生物との相互作用への関与も期待されている。今回、環状トリテルペノイドの植物生理学的な役割の解明のため、ミヤコグサより単離した3種のオキシドスクアレン閉環酵素(OSC)(β-amyrin合成酵素、lupeol合成酵素、cycloartenol合成酵素)cDNAを用いた形質転換ミヤコグサを作出した。RT-PCRを行った結果、それぞれ5-10の形質転換体ラインの構築が確認できた。特に根粒菌との相互作用への影響が期待されるβ-amyrin合成酵素過剰発現体は、T1個体を用い、フローサイトメトリー、RT-PCRによる2倍体形質転換体選抜を行った。現在、無菌播種したT2個体に根粒菌接種実験を行っている。一方、ミヤコグサOSC遺伝子解析の過程で、真核生物ステロール生合成の常識を覆し、植物のlanosterol合成酵素(LAS)の存在を比較ゲノム学的手法にて初めて明らかにした。シロイヌナズナ、オタネニンジンでもLASが同定され、双子葉植物一般にLASが存在すると考えられる。LASはナス科植物が生成し、抗菌、毒性を持つステロイドアルカロイドサポニンといつた生態生理活性物質の生成への関与が期待される。今回、LAS過剰発現、発現抑制形質転換トマト作成用ベクターを構築した。LAS過剰発現ベクターは、ミヤコグサLAScDNAを用いて構築した。発現抑制には、トマトESTデータベースより見いだしたLASの部分長cDNA(120bp)を、トマト(マイクロトム)未成熟果実よりRT-PCRにより増幅してpGWB80に導入しRNAi用ベクターとした。作成したベクターはAgrobacterium tumefaciensに導入した。

Higher plants are essential for their survival. They contain many kinds of ring species. The relationship between plant growth, differentiation, rhizosphere microbial interaction and biological activity Three kinds of closed-loop enzymes (OSC)(β-amyrin synthase, lupeol synthase, cycloartenol synthase)cDNA were used to make the transformation of the protein. RT-PCR results, including 5-10 of the qualitative transformation of the body to build a confirmation In particular, the effects of interaction between Rhizopus spp. were expected to affect the production of β-amyrin synthase, the selection of diploids for T1 individuals, and the selection of diploids for RT-PCR. Now, sterile seeding, T2 individual root fungus inoculation, The process of OSC gene analysis, the knowledge of eukaryotic biosynthesis, the existence of lanosterol synthase (LAS) in plants, and the methods of molecular biology are discussed. The plant is a natural plant, and the plant is a natural plant. The relationship and expectation between LAS and the production of eco-physiological active substances in plants of different families Now, LAS has developed, developed and suppressed the quality of the transformation, and the construction of the system has been carried out. LAS has been developed to support the construction of LAScDNA. The partial cDNA length (120bp) of LAS was amplified by RT-PCR and pGWB80 was introduced into the immature fruit. Make sure you have all the ingredients you need.

项目成果

Plant lanosterol synthase: divergence of the sterol and triterpene biosynthetic pathways in eukaryotes.

• DOI: 10.1093/pcp/pcj032
• 发表时间: 2006-05
• 期刊: Plant & cell physiology
• 影响因子: 4.9
• 作者: Satoru Sawai;T. Akashi;N. Sakurai;Hideyuki Suzuki;D. Shibata;S. Ayabe;T. Aoki