Functional analysis of complex type ubiquitin ligase

复合型泛素连接酶的功能分析

• 批准号: 18370076
• 负责人: KAMURA Takumi
• 金额: $ 11.28万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18370076/
• 关键词: Ubiouitin; protein degradation

Ubiquitylation and subsequent proteasomal degradation of regulatory proteins control a variety of cellular processes, including cell cycle progression, gene transcription, and signal transduction. The ubiquitin conjugation to target proteins is processed by three enzymes, El, E2, and E3. The E3s are responsible for recognizing and recruiting target proteins for polyubiquitylation. Cullin-based E3 complexes, that are well characterized E3s, are thought to regulate many cellular events. In this research, we try to clarify the function of one of Cu12-based E3s, ECV^<Fem1B>. Now we show that ECV^<Fem1B> is responsible for regulating the cellular level of Nek2, which functions as M-phase kinase, by targeting it for ubiquitylation and proteolysis. The elimination of Nek2 was impaired in Fem1B knockdown cells, resulting in abnormal accumulation of the protein. Coimmunoprecipitation analysis also revealed that Fem1B interacts with Nek2 in vivo. Overexpression of WT Nek2 promoted degradation of Nek2. Finally, the purified recombinant ECV^<Fem1B> complex mediated Nek2 ubiquitylation in vitro. These observations thus demonstrate that the ECV^<Fem1B> complex plays an important role in cell-cycle progression by determining the abundance of Nek2.

调节蛋白的泛素化和随后的蛋白酶体降解控制着多种细胞过程，包括细胞周期进程、基因转录和信号转导。泛素与靶蛋白的缀合由三种酶E1、E2和E3处理。 E3 负责识别和招募靶蛋白进行多泛素化。基于 Cullin 的 E3 复合物是经过充分表征的 E3，被认为可以调节许多细胞事件。在这项研究中，我们试图阐明基于 Cu12 的 E3 之一 ECV^<Fem1B> 的功能。现在我们发现 ECV^<Fem1B> 负责调节 Nek2 的细胞水平，Nek2 的功能相当于 M 相激酶，通过靶向 Nek2 进行泛素化和蛋白水解。 Fem1B 敲低细胞中 Nek2 的消除受到损害，导致蛋白质异常积累。免疫共沉淀分析还表明 Fem1B 在体内与 Nek2 相互作用。 WT Nek2 的过度表达促进了 Nek2 的降解。最后，纯化的重组ECV^<Fem1B>复合物在体外介导Nek2泛素化。因此，这些观察结果证明 ECV^<Fem1B> 复合物通过确定 Nek2 的丰度在细胞周期进展中发挥重要作用。

项目成果

転写伸長因子Elongin AのRNA polymerase IIユビキチン化への関与

转录延伸因子 Elongin A 参与 RNA 聚合酶 II 泛素化

• 发表时间: 2007
• 作者: Jin;C.;K.Kato;T.Chimura;T.Yamasaki;K.Nakade;T.Murata;H.Li;J.Pan;M.Zhao;K.Sun;R.Chiu;T.Ito et al.;安川 孝史
• 通讯作者: 安川 孝史

Fbxw8 Is Essential for Cul1-Cul7 Complex Formation and for Placental Development

• DOI: 10.1128/mcb.00595-06
• 发表时间: 2006-08
• 期刊: Molecular and Cellular Biology
• 影响因子: 5.3
• 作者: R. Tsunematsu;Masaaki Nishiyama;Shuhei Kotoshiba;T. Saiga;T. Kamura;K. Nakayama

「研究成果報告書概要(和文)」より

摘自《研究结果报告摘要（日文）》

• 发表时间: 2005
• 作者: Kawauchi;et. al.;Nishimura et al.;Dezawa et al.;Yoshizawa et al.;星野 幹雄;星野 幹雄
• 通讯作者: 星野 幹雄

細胞増殖抑制因子p27の新たな分解因子の分離精製及び解析

细胞增殖抑制剂p27新型降解因子的分离、纯化和分析

• 发表时间: 2006
• 作者: 嘉村 巧;中山 敬一
• 通讯作者: 中山 敬一

出芽酵母F-Box蛋白質Dia2と複製フォーク蛋白質との結合

酿酒酵母 F-Box 蛋白 Dia2 与复制叉蛋白的结合

• 发表时间: 2007
• 作者: 三村覚;嘉村巧
• 通讯作者: 嘉村巧