シロイヌナズナSGS3の生化学的解析及びその遺伝子ファミリーの機能解析

拟南芥SGS3生化分析及其基因家族功能分析

• 批准号: 18770042
• 负责人: 吉川 学
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: National Institute of Agrobiological Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18770042/
• 关键词: siRNA; ウイルス; RNAサイレンシング; ta-siRNA; サイレンシング; ウィルス

1.SGS3の生化学的解析昨年度に引き続き、trans-acting siRNAの生成に関わるSGS3の生化学解析を進めるために、GST融合タンパク質を発現し、精製したが、RNAとの直接的な結合は検出できなかった。このことから、sgs3変異体で見られる中間体RNAの蓄積は、SGS3がRNAに直接結合していない可能性が考えられ、その因子を同定することが必要であると思われる。しかし、SGS3タンパク質の精製過程でSGS3がオリゴマーを形成していることを見出し、酵母のツーハイブリッド法を用いてオリゴマー形成に重要な領域を調べた結果、C末端側のcoiled-coil領域が重要であることがわかった。また昨年度作製した、部位特異的変異体やN端、C末端欠失変異体を導入した形質転換体を解析した結果、SGS3の機能に重要なアミノ酸残基を同定した。他の植物のSGS3パラログの比較したところ、これらのアミノ酸が高度に保存されていることがわかった。さらに、オリゴマーを形成できないC末端欠失体もSGS3の機能を相補しなかった。2.SGS3相同遺伝子の逆遺伝学的解析SGS3に相同性のある6個の遺伝子間で機能重複の可能性が考えられたので、相同性の高い遺伝子についての多重変異体を作製したが、DCL2経路が関わるtumip vein clearing tobamovirusに対する抵抗性やDCL3経路できるsiRNAの発現を調べたが、影響は認められなかった。これらの結果は、SGS3相同遺伝子が他のRNAサイレンシグ経路に機能していないと考えられる。

1. Biochemical analysis of SGS3, trans-acting and trans-acting siRNA generation and biochemical analysis of SGS3 and GST fusionンパク性を発出できなかった, refined したが, RNA との direct combination は検出 できなかった.このことから, sgs3 variant で见られるintermediate RNA のaccumulation, SGS3 がRNA に正The combination of possibility and possibility, factor and factor are necessary and necessary.しかし, SGS3 タンパクquality の refining process でSGS3 がオリゴマーを Formation methodをUse the いてオリゴマー to form an important な field を tune べた result, and the C-terminal side のcoiled-coil field が で あ る こ と が わ か っ た. It was produced last year, and the site-specific variant was introduced and the N-terminal and C-terminal missing variants were analyzed and the results were analyzed. The functional and important acid residues of SGS3 were identified and determined. His plant's SGS3 パラログの compares したところ, これらのアミノ sour が高に preserves されていることがわかった. The function of the C-terminal defective body of the さらに and the オリゴマーをforming the できない body and the SGS3 complement each other. 2. Analysis of SGS3's identical genetic code and inverse genetic theory. Examination of the possibility of duplication of functions between six identical characters in SGS3.えられたので, Identical の高い伝子についてのmultiple variant body を Production したが, DCL2経路が关わるtumip vein clearing tobamovirusに対するresistantやDCL3経路できるsiRNAの発appearsを Adjustmentべたが、impactはcognitionめられなかった. The result of これらのは, SGS3 is the same as the original one.