シロイヌナズナSGS3の生化学的解析及びその遺伝子ファミリーの機能解析

拟南芥SGS3生化分析及其基因家族功能分析

• 批准号: 18770042
• 负责人: 吉川 学
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: National Institute of Agrobiological Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18770042/
• 关键词: siRNA; ウイルス; RNAサイレンシング; ta-siRNA; サイレンシング; ウィルス

1.SGS3の生化学的解析昨年度に引き続き、trans-acting siRNAの生成に関わるSGS3の生化学解析を進めるために、GST融合タンパク質を発現し、精製したが、RNAとの直接的な結合は検出できなかった。このことから、sgs3変異体で見られる中間体RNAの蓄積は、SGS3がRNAに直接結合していない可能性が考えられ、その因子を同定することが必要であると思われる。しかし、SGS3タンパク質の精製過程でSGS3がオリゴマーを形成していることを見出し、酵母のツーハイブリッド法を用いてオリゴマー形成に重要な領域を調べた結果、C末端側のcoiled-coil領域が重要であることがわかった。また昨年度作製した、部位特異的変異体やN端、C末端欠失変異体を導入した形質転換体を解析した結果、SGS3の機能に重要なアミノ酸残基を同定した。他の植物のSGS3パラログの比較したところ、これらのアミノ酸が高度に保存されていることがわかった。さらに、オリゴマーを形成できないC末端欠失体もSGS3の機能を相補しなかった。2.SGS3相同遺伝子の逆遺伝学的解析SGS3に相同性のある6個の遺伝子間で機能重複の可能性が考えられたので、相同性の高い遺伝子についての多重変異体を作製したが、DCL2経路が関わるtumip vein clearing tobamovirusに対する抵抗性やDCL3経路できるsiRNAの発現を調べたが、影響は認められなかった。これらの結果は、SGS3相同遺伝子が他のRNAサイレンシグ経路に機能していないと考えられる。

1. SGS3 の biochemistry analysis yesterday annual に lead き 続 き and trans - acting siRNA の generated に masato わ る SGS3 の biochemistry analytic を into め る た め に, GST fusion タ ン パ ク qualitative を 発 し, refined し た が, RNA と の directly な combined は 検 out で き な か っ た. こ の こ と か ら, sgs3 - variant で see ら れ の る intermediates RNA accumulation は, sgs3 が RNA に directly combined し て い な い possibility が exam え ら れ, そ の factor を be す る こ と が necessary で あ る と think わ れ る. し か し, SGS3 タ ン パ ク qualitative の refining process で SGS3 が オ リ ゴ マ ー を form し て い る こ と を see し, yeast の ツ ー ハ イ ブ リ ッ を ド method with い て オ リ ゴ マ ー form に important area な を adjustable べ た results, C terminal side の が coiled coil - field で あ る こ と が わ か っ た. ま た yesterday the annual cropping し た, site specific variations with や, C N end end owe loss - variant を import し た form quality planning in body を parsing し た results, SGS3 の function に important な ア ミ ノ acid residues を with fixed し た. He の plant の SGS3 パ ラ ロ グ の is し た と こ ろ, こ れ ら の ア ミ ノ acid が highly に save さ れ て い る こ と が わ か っ た. Youdaoplaceholder0, さらに リゴ, を, を, を, を, を, を form で, な, な, <s:1> c-terminal deficient bodies さらに, SGS3, <s:1> functions を to complement each other, な, った, った. 2. Same SGS3 heritage 伝 inverse posthumous child の 伝 learn analytical SGS3 に identity の あ る six の heritage 伝 で function between the child repeated の possibility が exam え ら れ た の で, high phase gay の い heritage 伝 son に つ い て の multiple variations variants を cropping し た が, DCL2 経 road が masato わ る tumip vein clearing Tobamovirus に す seaborne る resistance や DCL3 経 road で き る siRNA の 発 now を adjustable べ た が, affect は め ら れ な か っ た. こ れ ら の results は, SGS3 but same 伝 が him の RNA サ イ レ ン シ グ 経 road に function し て い な い と exam え ら れ る.