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トマトにおける細胞壁分解酵素の基質特異性と発現・機能解析

番茄细胞壁降解酶的底物特异性、表达及功能分析

基本信息

批准号：
18780025
负责人：
立石亮
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18780025/
关键词：
トマト α-アラビノフラノシダーゼ β-キシロシダーゼ形質転換軟化

项目摘要

果実細胞壁の構造変化によって、その果実に特有の肉質を形成し、さらに、成熟・過熟時における進行は著しい品質の低下をもたらす。多数の細胞壁代謝酵素のうち、アラビノースの遊離に働くことが推定されるα-アラビノフラノシダーゼについて、特にglycoside hydrolase family 3に分類される本酵素について、クローニングと発現解析、リコンビナントタンパクを利用した基質特異性の検討、および、機能解析のための形質転換体の作成を行うことにより、園芸作物(トマト)における本酵素の役割を明らかにすることを目的とした。1.トマト果実からglycoside hydrolase family 3に分類されるα-アラビノフラノシダーゼをクローニングし、全長塩基配列を決定した。4種のクローンが得られ、それらの発現パターンは、発現ステージならびに発現部位が各々で異なっていた。したがって、トマトの生長や成熟の様々なステージでglycoside hydrolase family 3に分類されるα-アラビノフラノシダーゼが作用していることが推定された。2.得られた遺伝子について、異種細胞系を用いたタンパク発現システムを構築した。大腸菌をホストとした形質転換では活性を有する形でのタンパク質合成は起こらなかった。植物系培養細胞に導入したところ、4種のクローンのうち3種類ではα-アラビノフラノシダーゼ及びβ-キシロシダーゼ活性の2つを有する2機能性の酵素であることが確認された。1種類のクローンについては、人工基質への反応がみられず、α-アラビノフラノシダーゼ及びβ-キシロシダーゼの定義はできなかった。3.トマトに本酵素遺伝子のアンチセンス遺伝子を導入した組み換え体のトマトを作出した。

As a result, the cell wall is made, the meat is formed, the meat is formed, and when it is ripe, it is used to improve the quality and quality. In most cases, the cell wall is substituted for enzymes, and it is presumed that there is no effect on the expression of enzymes in the cell wall. it is presumed that there is no significant difference in the expression of enzymes in the cell wall, in the cell wall The machine can be used to analyze the shape of the machine and make it into the system. The enzyme of this enzyme is used to cut the target. 1. The results show that glycoside hydrolase family 3 is classified into different categories, and the overall length of the system is determined by the allocation of information. 4. In the first place, you can see that there is a bad situation, and that you can see that there is a problem in the area. In terms of growth, growth, and maturity, glycoside hydrolase family 3 is classified into categories, and the effect is presumptive. two。 It is necessary to use a variety of cell lines to determine whether or not all kinds of cells will be affected. The fungus is active in the form of biosynthesis and synthesis. The cell culture of the plant is involved in the production of yeast, four kinds of yeast, the activity of α-enzyme and β-enzyme, the activity of enzyme 2, functional enzyme, enzyme and enzyme. 1. General information, artificial basis, alpha-ray, and β-ray are all defined. 3. In this enzyme system, the enzyme is used in the system, and the enzyme is used in the system.