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ニホンナシ果実の軟化関連酵素遺伝子の発現に関する研究

日本梨果实软化相关酶基因的表达研究

基本信息

批准号：
10760022
负责人：
立石亮
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10760022/
关键词：
ニホンナシ軟化酵素遺伝子 β-ガラクトシダーゼ

项目摘要

果実の軟化には細胞壁分解酵素の関与が示唆されており、現在、いくつかの細胞壁分解酵素について研究が進められている。多くの種類の果実において、軟化に伴って細胞壁からアラビノースやガラクトースが遊離することが報告されており、これらの中性糖の遊離に関与すると考えられるβ-ガラクトシダーゼが注目されている。近年、数種の植物からβ-ガラクトシダーゼ遺伝子が単離され、その塩基配列が明らかにされている。本研究では、これらの情報を元に、RT-PCR法によって、ニホンナシ果実からのβ-ガラクトシダーゼ遺伝子の単離を試みるとともに、その発現について検討した。材料には、ニホンナシ(豊水)を用い、果実の成熟ステージにしたがって経時的に採取した。果実組織よりトータルRNAを抽出し、オリゴdTプライマーを用いてcDNAを合成し、それを鋳型にPCRによってβ-ガラクトシダーゼ遺伝子を増幅した。また、RACE法によって5'の未知領域の配列を明らかにし、PCRによって全長のcDNAクローンを得た。デリーションクローンを作成し、全塩基配列を決定した。また、全長クローンをEco RI及びPst Iで切断した約700bpの断片をサブクローニングし、ジゴキシゲニンでラベルしたRNAプローブを作成し、ノーザン解析を行った。得られたクローンのORFは731のアミノ酸をコードしており、リンゴのβ-ガラクトシダーゼと98%の相同性がみられた。また、他の植物のβ-ガラクトシダーゼとも高い相同性を示した。得られたクローンは果実に特異的な発現を示し、かつ、成熟に伴ってその発現量が増大した。成熟に伴う発現量の増大は、ニホンナシ果実の中でも、軟化に重要と考えられているβ-ガラクトシダーゼIIIの活性の増大と一致した。以上から、得られたクローンはニホンナシの軟化に重要なβ-ガラクトシダーゼの遺伝子をコードしていることが示された。

The relationship between fruit softening and cell wall decomposing enzymes and research on the research on cell wall decomposing enzymes is now in progress. Many types of fruits, softening of the cell wall, softening of the cell wall, free of charge Tell us about されており, これらのneutral sugar free に关 and すると卡えられるβ-ガラクトシダーゼがAttention されている. In recent years, several kinds of plant からβ-ガラクトシダーゼ弝子が単里され and その塩组组式が明らかにされている. This research is based on the information of this research, the RT-PCR method of information, and the RT-PCR method. β-ガラクトシダーゼ伝子の単里をtrialみるとともに、その発成について検検问した. The raw materials are used, and the raw materials are used when the fruit is mature. The original tissue extracted RNA and the cDNA extracted from the dT RNAをSynthetic し, それを鋳 type にPCRによってβ-ガラクトシダーゼ伝子をamplified した.また, RACE method によって5' の unknown territory の arrangement を明らかにし, PCR によって full length のcDNA クローンを得た. The デリーションクローンを is made, and the whole base arrangement is decided.また, full length クローンをEco RI and びPst I cut the fragment of about 700 bp, をサブクローニングし, ジゴキシゲニンでラベルしたRNAプローブを作し, ノーザンANALYSISを行った. GET られたクローンのORFは731のアミノ sour をコードしており, リンゴのβ-ガラクトシダーゼと98%のidentityがみられた.また、his plantのβ-ガラクトシダーゼとも高いidentityをshowした. The unique られたクローンは Fruit 実に has the unique な発appearをshowし, かつ, and the mature に companion ってその発真人が嗗大した. Maturity is accompanied by the increase in the amount of the material, the fruit is in the medium, and the softening is important. Kaoられているβ-ガラクトシダーゼIIIのActivityのincreasing large and consistentした. Above から, get られたクローンはニホンナシのsofteningにimportantなβ-ガラクトシダーゼの缝子をコードしていることが出された.