二枚貝殺滅渦鞭毛藻ヘテロカプサ・サーキュラリスカーマの越冬形態の解明

阐明双壳类杀灭性甲藻 Heterocapsa roundiskama 的越冬形式

• 批准号: 18780150
• 负责人: 吉田 天士
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Fukui Prefectural University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18780150/
• 关键词: Heterocapsa circularisquama; 赤潮; モニタリング; PCNA; 定量的RT-PCR; 渦鞭毛藻; 増殖マーカー; 有害プランクトン; Heterocapsa.circularisquama

本研究では,二枚貝を特異的に殺滅する性質を持つ有害プランクトンHeterocapsa.circularisquamaの越冬メカニズムを解明することを目的としている。本種の越冬メカニズムを解明するにはそのモニタリング手法の開発が重要となる。近年,分子生物学的手法による本種モニタリングの導入も進められているが,いずれの手法も細胞の量的な情報しか読み取れず,増殖・衰退の過程など細胞の状態を測定する技術は皆無である。昨年度はDNA合成期に特異的に発現するProliferating Cell Nuclear Antigen(PCNA)のクローニングに成功した。そこで今年度は,これを増殖マーカーとした赤潮増殖診断法の開発を課題として設定した。・H.circularisquama OA-1株におけるPCNA遺伝子およびmitochondrial cytochrome b(cob)を標的としたプライマーを作製し,real-time PCR法による両遺伝子転写の定量化法を確立した。・H.circularisquama OA-1株を12.5℃および20℃下で培養し,直接計数法によって定期的に全細胞およびシストを計数し,増殖曲線の作製およびシスト形成率を算出した。その結果,20℃下では高い増殖速度で増殖するとともに,シスト形成率が減少した。一方,12.5℃下では増殖が抑制され,24日後にはシスト形成率が85%に達した。・上記の培養に対してPCNA遺伝子の転写量をcobに対する相対値として算出した結果,20℃下におけるPCNA遺伝子の転写量の相対値は定常期と比較して対数増殖期に高い値を示した。一方,12.5℃下におけるPCNA遺伝子の転写量の相対値はほぼ一定であった。したがってH.circularisquamaにおいて,PCNA遺伝子の転写量の相対値は,休眠期細胞の指標とならないものの,栄養増殖する細胞に対して増殖マーカーとなりうることが示唆された。今後,本種における種々の培養条件下でのPCNA遺伝子の発現様式を明らかにし,本種のモニタリング,特に越冬形態の解明に役立てたい。

This study で は, two pieces of bei を specific に kill す る nature を hold つ harmful プ ラ ン ク ト ン Heterocapsa. Circularisquama の wintering メ カ ニ ズ ム を interpret す る こ と を purpose と し て い る. The <s:1> overwintering メカニズムを of this species is explained. The するに そ そ そ <s:1> モニタリ グ グ グ technique <s:1> development が is important となる. In recent years, the technique of molecular biology に よ る this kind of モ ニ タ リ ン グ の import も into め ら れ て い る が, い ず れ の technique も cells の quantity な intelligence し か 読 み take れ ず, raised colonization, recession の process な ど cells の state を す る technology は nix で あ る. Last year, に specific に occurrence of するProliferating Cell Nuclear Antigen(PCNA) <s:1> <s:1> ロ ロ ニ ニ グに グに successfully <s:1> た during the <s:1> DNA synthesis period. そ こ で our は, "こ れ を raised colonization マ ー カ ー と し た red tides raised colonization diagnostics の open 発 を subject と し て set し た. · H.c ircularisquama OA - 1 strain に お け る PCNA posthumous son 伝 お よ び mitochondrial cytochrome b (cob) を mark と し た プ ラ イ マ ー し the を cropping systems, real - time PCR method に よ る struck heritage 伝 son planning write の を quantitative method to establish し た. · H.c ircularisquama OA - 1 strain を 12.5 ℃ お よ び で cultivate し under 20 ℃, direct counting method に よ っ て regular に whole-cell お よ び シ ス ト し を count, raised the yield curve の cropping お よ び シ ス を ト formation rate calculated し た. As a result, at 20℃, the で high <s:1> growth rate で growth するとと に に, the シスト formation rate が decreased by た た. On one side, at 12.5℃, で で proliferation が inhibits され, and after 24 days, the formation rate of に に シスト シスト が is が85%に to reach た. , written の cultivate に し seaborne て PCNA posthumous son 伝 の planning write quantity を cob に す seaborne seaborne る phase numerical と し て calculate し た result, 20 ℃ under に お け る traces of PCNA 伝 son の planning write quantity の phase numerical は seaborne steady compared と し て number raised on high colonization period に い numerical seaborne を shown し た. On the one hand, at 12.5℃, the amount of におけるPCNA remaining 伝 offspring <s:1> 転 writing <s:1> is correspondingly valued at ほぼ ほぼ for a certain であった. し た が っ て H.c ircularisquama に お い て, PCNA posthumous son 伝 の planning write quantity の numerical は seaborne, dormant cells の index と な ら な い も の の, tech students.their ownship have raised colonization す る cells に し seaborne て raised colonization マ ー カ ー と な り う る こ と が in stopping さ れ た. In the future, this kind of に お け る kind 々 の cultivation conditions で の PCNA posthumous son 伝 の 発 presently others type を Ming ら か に し, this kind of の モ ニ タ リ ン グ, special forms of wintering に の interpret に servants made て た い.

项目成果

貝毒研究の最先端-現状と展望(有毒プランクトンの毒遺伝子による検出と定量の試み)(今井一郎, 福与康夫, 広石伸互編)

贝类毒素的前沿研究 - 现状与展望（利用有毒基因检测和定量有毒浮游生物的尝试）（今井一郎、福代康夫、广石信孝编）

• 发表时间: 2006
• 作者: 吉田天士;広石伸互
• 通讯作者: 広石伸互