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オーファンGPCRの生体内脂質リガンドの同定と機能解析

孤儿GPCR体内脂质配体的鉴定和功能分析

基本信息

批准号：
18790194
负责人：
奥野利明
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790194/
关键词：
GPCR 脂質 BLT12 ロイコトリエン B4 G タンパク質 BLT1 ロイコトリエンB4 Gタンパク質

项目摘要

ラットの脳、肝臓及び小腸からクロロホルムとメタノールを用いて全脂質を抽出し、さらにアセトン分画法により単純脂質と複合脂質に分画した。オーファン受容体を恒常的に発現するCHO-K1細胞株を20種類あまり樹立し、サイトセンサー法を用いて受容体活性化能を調べた。各臓器由来の脂質の受容体活性化能を検討した結果、ラット小腸のアセトン可溶画分がロイコトリエンB4(LTB4)の低親和性受容体として同定されたBLT2を活性化できることを見出した。高速液体クロマトグラフィーと質量分析計を用いた解析を行い、シクロオキシゲナーゼ産物である12-ヒドロキシヘプタデカ-5Z,8E,10E-トリエノイック酸(12-HHT)が、BLT2の高親和性リガンドであることを同定した。12-HHTは、リガンド結合実験、GTPγS取り込み実験、細胞内カルシウム上昇反応、細胞走化性のいずれにおいても、LTB4よりも1桁以上低い濃度でBLT2を活性化した。12-HHTの産生に関わるCOX-1の遺伝子欠損マウス由来の小腸の脂質は、BLT2活性化能が有為に低下していた。さらに、マウス骨髄由来マスト細胞に機能的なBLT2が発現し、12-HHTに対して顕著な走化性を示すことを明らかにした。これまで12-HHTはトロンボキサン生成時の単なる副産物として考えられていたが、BLT2アゴニストとしての生体機能があることが明らかにすることができた。

The total lipid was extracted from the liver and small intestine and separated into pure lipid and complex lipid. CHO-K1 cell line was established by using the method of cell culture. The activity of lipid receptor derived from each organ was investigated. The results showed that the soluble fraction of small intestine was activated by BLT2 and the soluble fraction of small intestine was activated by BLT 4. High speed liquid chromatography mass spectrometry analysis of the use of medium resolution, the use of high speed liquid chromatography mass spectrometry mass spectrometry 12-HHT is active at low concentrations above 1 ° C, GTPγS is active at low concentrations above 1 ° C, intracellular cell turnover is elevated, cytochemical activity is elevated, and BLT2 is activated. The production of 12-HHT is related to the loss of COX-1 gene, the origin of lipid in the small intestine, and the activity of BLT-2. The BLT2 gene was found in the cells and the 12-HHT gene was found in the cells. 12-HHT is a by-product of the production process, BLT2 is a by-product of the production process, BLT2 is a by-product of the production process, and BLT2 is a by-product of the production process.