オーファンGPCRの生体内脂質リガンドの同定と機能解析

孤儿GPCR体内脂质配体的鉴定和功能分析

• 批准号: 18790194
• 负责人: 奥野 利明
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790194/
• 关键词: GPCR; 脂質; BLT12; ロイコトリエン B4; G タンパク質; BLT1; ロイコトリエンB4; Gタンパク質

ラットの脳、肝臓及び小腸からクロロホルムとメタノールを用いて全脂質を抽出し、さらにアセトン分画法により単純脂質と複合脂質に分画した。オーファン受容体を恒常的に発現するCHO-K1細胞株を20種類あまり樹立し、サイトセンサー法を用いて受容体活性化能を調べた。各臓器由来の脂質の受容体活性化能を検討した結果、ラット小腸のアセトン可溶画分がロイコトリエンB4(LTB4)の低親和性受容体として同定されたBLT2を活性化できることを見出した。高速液体クロマトグラフィーと質量分析計を用いた解析を行い、シクロオキシゲナーゼ産物である12-ヒドロキシヘプタデカ-5Z,8E,10E-トリエノイック酸(12-HHT)が、BLT2の高親和性リガンドであることを同定した。12-HHTは、リガンド結合実験、GTPγS取り込み実験、細胞内カルシウム上昇反応、細胞走化性のいずれにおいても、LTB4よりも1桁以上低い濃度でBLT2を活性化した。12-HHTの産生に関わるCOX-1の遺伝子欠損マウス由来の小腸の脂質は、BLT2活性化能が有為に低下していた。さらに、マウス骨髄由来マスト細胞に機能的なBLT2が発現し、12-HHTに対して顕著な走化性を示すことを明らかにした。これまで12-HHTはトロンボキサン生成時の単なる副産物として考えられていたが、BLT2アゴニストとしての生体機能があることが明らかにすることができた。

ラ ッ ト の 脳, liver perforatien and び small intestine か ら ク ロ ロ ホ ル ム と メ タ ノ ー ル を with い て whole mass を drew し, さ ら に ア セ ト ン points illustration に よ り 単 pure lipid と composite lipid に points draw し た. オ ー フ ァ ン by let body を constant に 発 now す る CHO - K1 cell lines を 20 kinds あ ま り し, サ イ ト セ ン サ を ー method with い て by let body activeness to を べ た. Each viscera origin の lipid の is can let body activeness を beg し 検 た results, ラ ッ ト small intestine の ア セ ト ン soluble draw points が ロ イ コ ト リ エ ン B4 (LTB4) の low affinity by let body と し て with fixed さ れ た BLT2 を activeness で き る こ と を shows し た. High speed liquid ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー と quality analysis meter を with い た parsing を い, シ ク ロ オ キ シ ゲ ナ ー ゼ product で あ る 12 - ヒ ド ロ キ シ ヘ プ タ デ カ - 5 z, 8 e, e - 10 ト リ エ ノ イ ッ ク acid (12 - HHT) が, BLT2 の high-affinity リ ガ ン ド で あ る こ と を with fixed し た. 12 - HHT は, リ ガ ン ド combination be 験, GTP gamma S made り 込 み be 験, intracellular カ ル シ ウ ム rise against 応, cells go sexual の い ず れ に お い て も, LTB4 よ り も 1 girder above low concentration い で BLT2 を activeness し た. 12 - the sense of HHT の に masato わ る COX 1 の heritage 伝 son owe loss マ ウ ス origin の small intestine の lipid は, BLT2 activeness to が for low に し て い た. さ ら に, マ ウ ス bone marrow origin マ ス ト cell function of に な BLT2 が 発 し, 12 - HHT に し seaborne て 顕 the な go voltinism を shown す こ と を Ming ら か に し た. こ れ ま で 12 - HHT は ト ロ ン ボ キ サ ン generated when の 単 な る by-products と し て exam え ら れ て い た が, BLT2 ア ゴ ニ ス ト と し て の raw body enginery が あ る こ と が Ming ら か に す る こ と が で き た.

项目成果

ロイコトリエンB4受容体(BLT1)のヘリックス8の機能解明とGi タンパク質選択的共役部位の同定

阐明白三烯 B4 受体 (BLT1) 螺旋 8 的功能并鉴定 Gi 蛋白选择性偶联位点

• 发表时间: 2007
• 作者: Nobuhisa;I.;Takeya;R.;Ogura;K.;Ueno;N.;Kohda;D.;Inagaki;F.;Sumimoto;H.;奥野利明
• 通讯作者: 奥野利明

ロイコトリエンB4受容体の細胞内領域の役割

白三烯 B4 受体细胞内区域的作用

• 发表时间: 2008
• 作者: 奥野利明