生体内におけるヒストンH2Aリン酸化の機能解析

体内组蛋白H2A磷酸化的功能分析

• 批准号: 18790207
• 负责人: 沖 昌也
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: University of Fukui
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790207/
• 关键词: ヒストン; タンパク質; 遺伝子; リン酸化; 細胞・組織

1、VRK1によるヒストンH2Aリン酸化の関与昨年度までに、39種類の細胞株に関してM期同調、非同調抽出液を用い、ヒストンH2A(Thr120)のリン酸化状態を解析した。その結果、5種類の細胞株に関し、ヒストンH2A(Thr120)がM期特異的にリン酸化されることを見い出した。本年度は、これら5種類の細胞株を用い、VRK1をRNAiシステムを用いノックアウトしVRK1がヒストンH2A(Thr120)のリン酸化に直接関与しているか解析した。ヒストンH2A(Thr120)リン酸化抗体を用い、ウエスタンブロッティング法により解析した結果、野生株と比較し、VRK1欠損株ではヒストンH2A(Thr120)のリン酸化レベルが減少していることを見い出した。この結果はVRK1がヒストンH2A(Thr120)のリン酸化に直接関与することを示唆した。また、RNAiシステムを用いVRK1を欠損させた細胞では増殖阻害も見られた。2、精製VRK1蛋白質を用いた解析(a)Flag-tagを融合したVRK1をゲノム上に挿入したstable strainを作成した。この細胞株を作成したことにより、同調した細胞からも容易に、かつ多量にFlag-VRK1蛋白質を精製することが可能となった。Flag-VRK1蛋白質を胞から抽出し、in vitroのシステムを用い、ヒストンH2A(Thr120)をリン酸化出来るかを解析した。現在までの結果では、単独でのリン酸化活性は見られず、複合体によりリン酸化されることが示唆された。(b)tagを用いず、幾つかのカラムを用いることにより精製を行った。具体的にはカラムを通した後の全てのフラクションに関し、in vitroのシステムを用いヒストンH2A(Thr120)のリン酸化活性を測定した。同時に抗VRK1抗体を用いたウエスタンブロティング法を行い活性を持つフラクションにVRK1が存在しているかを解析した。

1. The VRK1 concentration of H2A was the same as that of last year's, 39, and the same as that of the same extraction solution. H2A (Thr120) was used to analyze the acidification status. The results showed that the cell lines of 5 species and the special phase of H2A (Thr120) M were acidified, and the results showed that there were significant differences between the two groups. This year, the use of cell lines such as VRK1, RNAi, and VRK1RNAi has been studied. This year, the direct acidification method has been used for direct acidification and analysis. The results were analyzed by using the method of acidifying antibodies against H2A (Thr120). The results of wild plants were compared, and the results of VRK1 were not detected. H2A (Thr120) was acidified. The results showed that the acidification of H2A (Thr120) was directly related to that of VRK1. RNAi, RNAi, VRK1, RNAi, RNAi and RNAi. 2. The sperm VRK1 protein was analyzed by (a) Flag-tag fusion VRK1 protein was inserted into the stable strain to make the fusion protein. The cell line was made into the same cell line, the same cell line, the cell line, the cell line, Flag-VRK1 protein was extracted from cells, in vitro protein was extracted from cells, H2A (Thr120) was acidified and purified. At present, the results show that the acidizing activity is different, and the complex acidizing activity is instigated. (B) tag is used in the first place, and in other words, it is necessary to do so. In the end, the whole system was used to determine the acidizing activity of H2A (Thr120). The in vitro was used to determine the acidizing activity. At the same time, the anti-VRK1 antibody was detected by Elisa. The activity of anti-VRK1 antibody was detected by Elisa.

项目成果

出芽酵母染色体上における境界形成機構の解析

酿酒酵母染色体边界形成机制分析

• 发表时间: 2007
• 作者: Aoi W;Takanami Y;Kawai Y;Naito Y;Yoshikawa T.;MASAYA OKI;MASAYA OKI;Naoyuki Hayashi;Maria Valencia-Burton;沖 昌也;沖 昌也
• 通讯作者: 沖 昌也

出芽酵母を用いたヘテロクロマチン領域伸長停止メカニズムの解析

利用酿酒酵母分析异染色质区域伸长停滞的机制

• 发表时间: 2008
• 作者: Aoi W;Takanami Y;Kawai Y;Naito Y;Yoshikawa T.;MASAYA OKI;MASAYA OKI;Naoyuki Hayashi;Maria Valencia-Burton;沖 昌也
• 通讯作者: 沖 昌也

Role of histone phosphorylation in chromatin dynamics and its implications in diseases.

组蛋白磷酸化在染色质动力学中的作用及其对疾病的影响。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Subcell Biochem 41
• 作者: Oki;M.;Aihara;H.;Ito;T.
• 通讯作者: T.

Identification of novel suppressors for Mogl implies its involvement in RNA metabolism, lipid metabolism and signal transduction.

Mogl 新型抑制剂的鉴定意味着它参与 RNA 代谢、脂质代谢和信号转导。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Gene 400
• 作者: Aoi W;Takanami Y;Kawai Y;Naito Y;Yoshikawa T.;MASAYA OKI
• 通讯作者: MASAYA OKI

Temperature-sensitive detects of the GSPI gene, yeast Ran homologue, activate the Tell-dependent pathway.

对 GSPI 基因（酵母 Ran 同源物）的温度敏感检测可激活 Tell 依赖性途径。

• 发表时间: 2007
• 期刊: BBRC 353
• 作者: Aoi W;Takanami Y;Kawai Y;Naito Y;Yoshikawa T.;MASAYA OKI;MASAYA OKI;Naoyuki Hayashi
• 通讯作者: Naoyuki Hayashi